一种电激活设备及采用其的卵母细胞或者胚胎的RNA干扰方法
摘要文本
本发明公开了一种电激活设备及采用其的卵母细胞或者胚胎的RNA干扰方法，该电激活设备通过在平行电极(1)设置弯折部(2)以绕过小容器(3)的边缘并落入大容器(4)中。该RNA干扰方法的步骤为：电激活槽上覆盖含有干扰RNA的电激活液F+；在电激活槽中放入待激活的卵母细胞或胚胎进行电激活；电激活结束后放入添加干扰RNA的体外操作液T2中放置1～2小时；最后放入装有化学激活液的化学激活盘中继续化学激活4～6小时，至此完成该RNA干扰过程。本发明的RNA干扰方法简单有效，达到了RNA干扰的目的，避免了显微注射针带来的伤害，并解决了无透明带的卵母细胞或者胚胎的RNA干扰问题，节约成本和资源。
申请人信息
- 申请人:南京农业大学
- 申请人地址:210095 江苏省南京市溧水区白马镇国家农业科技园南京农业大学基地
- 发明人: 南京农业大学
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种电激活设备及采用其的卵母细胞或者胚胎的RNA干扰方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN201611202398.2 |
| 申请日 | 2016年12月23日 |
| 公告号 | CN106754348B |
| 公开日 | 2024年2月9日 |
| IPC主分类号 | C12M1/42 |
| 权利人 | 南京农业大学 |
| 发明人 | 李娟; 曾亚琼; 陈宝宝; 迟大明 |
| 地址 | 江苏省南京市栖霞区八卦洲街道江苏省栖霞现代农业产业园区南京农业大学现代园艺产业科技创新中心 |
专利主权项内容
1.一种采用电激活设备的卵母细胞或者胚胎的RNA干扰方法，其特征在于：所述RNA干扰方法采用的电激活设备包括平行电极(1)，所述的平行电极(1)上设有一突起的弯折部(2)，该弯折部(2)使得该平行电极(1)的前端能够绕过小容器(3)的边缘并落入大容器(4)中，且该平行电极(1)的前端分别与正、负电源线电性相连，使落入小容器(3)内的平行电极(1)之间的区域构成电激活槽(5)；所述的弯折部(2)至该平行电极(1)前端的距离为整个平行电极(1)长度的1/4～1/3，且弯折部(2)的高度不低于小容器(3)的边缘竖直高度；位于小容器(3)和大容器(4)内的平行电极(1)之间的间距固定，同时位于小容器(3)内的平行电极(1)的后端整体胶封且位于大容器(4)内的平行电极(1)的两条电极分别胶封；所述的小容器(3)放置在大容器(4)内；该RNA干扰方法的步骤如下：a、在小容器内的平行电极上添加含有干扰RNA的电激活液F+以覆盖电激活槽，电激活液F+为0.3mol/L甘露醇、0.1mmol/L硫酸镁、0.05nmol/L氯化钙、0.01%g/L聚乙烯醇混合构成；b、将平行电极的前端连接BLS细胞融合仪的正、负电极，在电激活槽中以每组10-20个的数量放入待激活的卵母细胞或胚胎，点击BLS细胞融合仪的电源按钮进行电激活；c、电激活结束后将激活的卵母细胞或胚胎放入添加干扰RNA的体外操作液T2：HEPES-TCM199+2%CS中，放置1～2小时；d、随后把卵母细胞或胚胎放入装有化学激活液的化学激活盘中，化学激活液为胚胎体外培养液+10ug/ml放线菌酮+5ug/ml细胞松弛素B，在38.5℃、5%CO、20% O、100%HO的培养箱中继续化学激活4～6小时，至此完成该RNA干扰过程；222所述步骤a和步骤c中的干扰RNA为FAM荧光标记的LIPIN1干扰RNA，且步骤a和步骤c中的干扰RNA的浓度为200～400nmol/L。