特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗在线免疫亲和净化检测装置

专利主权项内容

1.一种特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗在线免疫亲和净化检测装置，其特征在于，包括免疫亲和柱上样-转移单元、脱盐-再转移单元、分离-检测单元；所述免疫亲和柱上样-转移单元包括上样泵(1)、进样器(2)、A六通阀(3)、转移泵(4)、免疫亲和净化色谱柱(5)，A六通阀(3)依次包括A六通阀第一旁通口、A六通阀第二旁通口、A六通阀第三旁通口、A六通阀第四旁通口、A六通阀第五旁通口、A六通阀第六旁通口，上样泵(1)通过管路与进样器(2)连接，进样器(2)出口与A六通阀第一旁通口连接，A六通阀第三旁通口连接转移泵(4)，A六通阀第二旁通口和A六通阀第五旁通口之间连接有免疫亲和净化色谱柱(5)，A六通阀第六旁通口为废液出口；脱盐-再转移单元包括脱盐泵(6)、三通(7)、MCX柱(9)、B六通阀(8)，B六通阀(8)依次包括B六通阀第一旁通口、B六通阀第二旁通口、B六通阀第三旁通口、B六通阀第四旁通口、B六通阀第五旁通口、B六通阀第六旁通口，B六通阀第一旁通口与A六通阀第四旁通口相连，B六通阀第二旁通口连接三通(7)，三通(7)的另外两个旁通口分别连接脱盐泵(6)和MCX柱(9)，MCX柱(9)的另一端连接在B六通阀第五旁通口上，B六通阀第三旁通口被死堵头封堵，B六通阀第六旁通口为废液出口；分离-检测单元包括洗脱泵(12)、分析柱(13)、串联质谱检测器(14)、C六通阀(11)，C六通阀(11)依次包括C六通阀第一旁通口、C六通阀第二旁通口、C六通阀第三旁通口、C六通阀第四旁通口、C六通阀第五旁通口、C六通阀第六旁通口，C六通阀第一旁通口与B六通阀第四旁通口相连, C六通阀第五旁通口连接洗脱泵(12)，C六通阀第六旁通口上连接分析柱(13)，分析柱(13)出口连接串联质谱检测器(14)，C六通阀第四旁通口被死堵头封堵，C六通阀第二旁通口为废液出口；所述A六通阀第六旁通口、B六通阀第六旁通口和C六通阀第二旁通口共同连接在废液瓶(10)上；所述免疫亲和净化色谱柱(5)包括柱接头(5-1)、螺母(5-2)、填充柱管(5-3)、琼脂糖凝胶(5-4)、垫圈(5-5)、筛板(5-6)；填充柱管(5-3)内填设有琼脂糖凝胶(5-4)，琼脂糖凝胶(5-4)采用的是偶联有特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗抗体的琼脂糖凝胶；填充柱管(5-3)的两端均设有筛板(5-6)，填充柱管的两端的筛板(5-6)外侧通过螺母(5-2)固定有柱接头(5-1)，柱接头(5-1)与填充柱管(5-3)之间填设有垫圈(5-5)；在进行特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗在线免疫亲和净化检测时，分为五个步骤：上样、转移、脱盐、再转移、分离、检测；上样时，A六通阀(3)和C六通阀(11)的第一旁路通口与第二旁路通口联通，B六通阀(8)的第一旁路通口与第六旁路通口联通，免疫亲和净化色谱柱(5)、MCX柱(9)与分析柱(13)独立，上样泵(1)提供pH 7.4的磷酸盐缓冲液，含有特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗的样品提取液被带入免疫亲和净化色谱柱(5)，特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗被吸附，杂质未被吸附而随上样液进入废液瓶(10)，MCX柱(9)与分析柱(13)处于初始流动相平衡阶段；转移时A六通阀(3)的第一旁路通口与第六旁路通口联通，B六通阀(8)和C六通阀(11)的第一旁路通口与第二旁路通口联通，净化色谱柱(5)与MCX柱(9)串联使用，转移泵(4)提供色氨酸缓冲液，转移流速为0.4mL/min，净化色谱柱(5)上富集的特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗随洗脱液进入MCX柱(9)，转移时间3min；脱盐时六通阀联通方式与上样时相同，净化色谱柱(5)与MCX柱(9)并联使用，脱盐泵(6)提供0.1％甲酸水溶液，脱去洗脱液中的盐分；再转移时，A六通阀(3)的第一旁路通口与第二旁路通口联通，B六通阀(8)和C六通阀(11)的第一旁路通口与第六旁路通口联通，MCX柱(9)与分析柱(13)串联，脱盐泵(6)改提供2％氨水-甲醇溶液，MCX柱上吸附的特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗被转移到分析柱(13)，分析柱(13)采用的是4.6mm×100mm且粒径为3微米的C18填料的色谱柱；分离和检测时，六通阀联通方式与上样时相同，净化色谱柱(5)、MCX柱与分析柱(13)并联，净化色谱柱(5)通过上样泵(1)提供的磷酸盐缓冲液进行冲洗与平衡，MCX柱(9)通过脱盐泵依次提供的2％氨水-甲醇、0.1％甲酸水溶液平衡；分析柱(13)通过洗脱泵(12)提供的梯度洗脱溶液，将特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗分离并带入串联质谱检测器(14)，实现特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗的检测。