植物作为宿主在表达卡那抗体中的应用
摘要文本
本发明涉及生物技术领域，特别涉及植物作为宿主在表达卡那抗体的应用。本发明利用植物例如生菜作为重组蛋白质生产的有效表达平台，利用简单以及有效的农杆菌介导真空渗透方法来表达卡那单克隆抗体(Canakinumab，Ilaris，ACZ885，人抗白介素‑1β单克隆抗体)。该表达体系确定植物外源蛋白在农杆菌侵染4d后就可以收集。利用SDS‑PAGE法确定重组卡那抗体成功表达。多行核白细胞抑制实验证明生菜生产的卡那抗体具有抑制白介素‑1β以及抑制中性粒细胞的生物学活性。
申请人信息
- 申请人:北京睿诚海汇健康科技有限公司
- 申请人地址:102104 北京市延庆区千家店镇六道河村65号-3室
- 发明人: 北京睿诚海汇健康科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 植物作为宿主在表达卡那抗体中的应用 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN201710977067.4 |
| 申请日 | 2017年10月19日 |
| 公告号 | CN107723310B |
| 公开日 | 2024年1月9日 |
| IPC主分类号 | C12N15/82 |
| 权利人 | 北京睿诚海汇健康科技有限公司 |
| 发明人 | 王跃驹; 马洁; 焦顺昌 |
| 地址 | 北京市延庆区千家店镇六道河村65号-3室 |
专利主权项内容
1.一种植物作为宿主表达卡那抗体的方法，其特征在于，将表达载体转化到农杆菌中，通过农杆菌介导真空渗透入植物组织后，提取、分离蛋白质，获得卡那抗体；所述植物为生菜；所述表达载体包括卡那的重链序列或轻链序列以及载体；所述卡那的重链序列或轻链序列为将卡那重链、卡那轻链的密码子优化为植物偏好的密码子，获得的优化的卡那的重链序列或优化的卡那的轻链序列；所述优化的卡那的重链序列如SEQ ID No.1所示；所述优化的卡那的重链的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述优化的卡那的轻链序列如SEQ ID No.3所示；所述优化的卡那的轻链的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述载体为双元植物载体；所述表达载体的构建方法包括如下步骤：步骤1：分别将卡那重链、卡那轻链的密码子优化为植物偏好的密码子，获得：ⅰ.优化的卡那的重链序列；ⅱ.优化的卡那的轻链序列；步骤2：在所述优化的卡那的重链序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位点，在3’末端加入SacI位点；在所述优化的卡那的轻链序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位点，在3’末端加入SacI位点；克隆到pUC57载体中，分别获得pCana-H克隆载体，pCana-L克隆载体；步骤3：通过Xbal/Sacl分别从步骤2所得的克隆载体中获得基因片段，克隆至双元植物载体pCam35S，分别获得表达载体p35S-Cana-H，p35S-Cana-L；所述农杆菌介导真空渗透包括如下步骤：步骤1：抽真空25～45s；步骤2：保持真空-95kPa压力30～60s；步骤3：释放压力使得渗透液渗入所述植物组织；重复上述步骤2～3次，避光处理4d。 马-克-数据