高产吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌株及其构建方法
摘要文本
本发明公开了一株高产吩嗪‑1‑甲酰胺的基因工程菌株及其构建方法;所述基因工程菌株具体是敲除绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)HT66CCTCC NO : M 2013467基因组的lon基因、parS基因中的一个或两个基因而得到基因工程菌株;或者,敲除绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)HT66CCTCC NO : M 2013467rpeA、psrA单突变株或者双突变株基因组的lon基因、parS基因中的一个或两个基因而得到基因工程菌株;其中,所述单突变株为HT66ΔrpeA、HT66ΔpsrA,双突变株为HT66ΔrpeAΔpsrA。与现有技术相比,本发明从一株绿针假单胞菌出发,将该菌基因组中lon和parS基因删除后,吩嗪‑1‑甲酰胺的发酵产量高达2425mg/L,可以用于吩嗪‑1‑甲酰胺的工业化生产与农业应用。
申请人信息
- 申请人:上海交通大学
- 申请人地址:200240 上海市闵行区东川路800号
- 发明人: 上海交通大学
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 高产吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌株及其构建方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN201610704406.7 |
| 申请日 | 2016年8月22日 |
| 公告号 | CN106635937B |
| 公开日 | 2024年1月30日 |
| IPC主分类号 | C12N1/21 |
| 权利人 | 上海交通大学 |
| 发明人 | 彭华松; 张雪洪; 谭剑 |
| 地址 | 上海市闵行区东川路800号 |
专利主权项内容
1.一株高产吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌株,其特征在于,具体是敲除绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)HT66 CCTCC NO:M 2013467基因组的lon基因或lon和parS基因而得到基因工程菌株;或者,敲除绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)HT66 CCTCC NO:M 2013467rpeA、psrA单突变株或者双突变株基因组的lon基因、parS基因中的一个或两个基因而得到基因工程菌株HT66ΔlonΔrpeA、HT66ΔlonΔparSΔrpeA、HT66ΔlonΔpsrA、HT66ΔlonΔparSΔpsrA、HT66ΔlonΔpsrAΔrpeA、HT66ΔlonΔparSΔpsrAΔrpeA;其中,所述单突变株为HT66ΔrpeA、HT66ΔpsrA,双突变株为HT66ΔrpeAΔpsrA;所述lon基因的碱基序列如SEQ ID NO.1所示;所述parS基因的碱基序列如SEQ IDNO.2所示;所述高产吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌株进行构建时,其采用以下步骤进行构建:i、扩增lon基因或parS基因片段的上下游同源臂;ii、采用融合PCR法连接上下游同源臂并插入pK18mobsacB质粒中得lon基因或parS基因重组质粒;iii、(a)使lon基因重组质粒上的lon基因上下游同源臂片段与HT66、HT66ΔparS、HT66ΔrpeA、HT66ΔrpeAΔparS、HT66ΔpsrA、HT66ΔpsrAΔparS、HT66ΔrpeAΔpsrA、HT66ΔrpeAΔpsrAΔparS基因组中的lon基因发生同源重组;或(b)使parS基因重组质粒上的parS基因上下游同源臂片段与HT66Δlon、HT66ΔrpeA、HT66ΔrpeAΔlon、HT66ΔpsrAΔlon、HT66ΔrpeAΔpsrAΔlon基因组中的parS基因发生同源重组;筛选阳性克隆,即得。