用于包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒、假病毒、试剂盒和方法
摘要文本
本发明涉及用于包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒、假病毒、试剂盒和方法。包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒，pEGFP‑CV‑B5/417质粒表达的CV‑B5结构蛋白在细胞中可以包装pCVB3‑复制子转录的CV‑B3亚基因组RNA，产生的假病毒可以用来检测中和抗体。本发明公开了一种安全，灵敏，快速，特异，简便且成本低廉的检测CV‑B5中和抗体的方法。本发明非常适合于快速，大规模地检测中和抗体的试验，对于病毒疫苗的研制及检测患者个体及人群CV‑B5特异性中和抗体水平有着重要的应用价值。
申请人信息
- 申请人:中国食品药品检定研究院
- 申请人地址:100050 北京市崇文区天坛西里2号
- 发明人: 中国食品药品检定研究院
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 用于包装柯萨奇病毒B5假病毒的重组表达质粒、假病毒、试剂盒和方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN201611237789.8 |
| 申请日 | 2016年12月28日 |
| 公告号 | CN106884017B |
| 公开日 | 2024年3月26日 |
| IPC主分类号 | C12N15/41 |
| 权利人 | 中国食品药品检定研究院 |
| 发明人 | 梁争论; 陈盼; 吴星; 李文辉; 隋建华 |
| 地址 | 北京市崇文区天坛西里2号 |
专利主权项内容
1.一种假病毒，其特征在于，由重组表达质粒pEGFP-CV-B5/417表达的柯萨奇病毒B5结构蛋白和重组表达质粒pCVB3-复制子转录的CV-B3亚基因组RNA组装而成；所述重组表达质粒pEGFP-CV-B5/417使用绿色荧光蛋白报告基因，且含有融合基因I，所述融合基因I是通过将绿色荧光蛋白EGFP的基因序列与CV-B5/417所有结构蛋白的基因序列拼接，并将2A蛋白酶的酶切位点插入EGFP基因的C末端拼接得到，所述融合基因I的核苷酸序列为SEQ ID NO：3；所述重组表达质粒pCVB3-复制子的报告基因为萤火虫荧光素酶报告基因，且含有融合基因II，所述融合基因II是通过将CV-B3/Nancy的5’UTR，荧光素酶基因和CV-B3基因组的非结构蛋白基因及其之后的序列用重叠PCR方法拼接，得到，所述融合基因II的核苷酸序列为SEQ ID NO：4；所述SEQ ID NO：3第1位到717位为绿色荧光蛋白的编码基因；第718位到732位为肠道病毒的2A蛋白酶的识别位点；第733位到3282位为CV-B5/417所有结构蛋白的编码基因，编码由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述SEQ ID NO：4第1位到742位为CV-B3/Nancy的5’UTR核苷酸序列；第743位到2392位为荧光素酶基因的核苷酸序列，第2393位到2410位为2A蛋白酶的识别位点；第2411位到6520位为CV-B3/Nancy非结构蛋白的编码基因；所述重组表达质粒pCVB3-复制子中在融合基因II的5’UTR前引入T7promoter的序列。