一种氨基微球有序固定多酶的方法、其产物和应用
摘要文本
本发明是一种氨基微球有序固定多酶的方法、其产物和应用，属于基因工程、酶固定化和生物催化技术领域。所述方法包括：制备多孔氨基化固定化载体；制备融合蛋白QT‑PPK‑DC，SC‑FucT2‑DC，Fkp‑ST；往多孔氨基化固定化载体中加入QT‑PPK‑DC，并加入谷氨酰胺转胺酶MTG；将得到的产物重新分散到SC‑FucT2‑DC中；将得到的产物重新分散到Fkp‑ST中，得到三酶有序固定化氨基微球，并将微球用于合成2‑岩藻糖基乳糖中，最终在初步催化中即得到4.17g/L的2’‑岩藻糖基乳糖。本发明的优点：多酶固定化的方向以及顺序可控，参与级联反应的酶蛋白之间催化活性口袋距离较近，进一步提高催化效率；生物正交化学的固定方式中使用细胞破碎液上清，同步固定与纯化且自然温和，在很大程度上保留了酶蛋白的催化活性。 该数据由<马克数据网>整理
申请人信息
- 申请人:杭州师范大学
- 申请人地址:310000 浙江省杭州市余杭塘路2318号杭州师范大学勤园17-301
- 发明人: 杭州师范大学
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种氨基微球有序固定多酶的方法、其产物和应用 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311399692.7 |
| 申请日 | 2023/10/26 |
| 公告号 | CN117535281A |
| 公开日 | 2024/2/9 |
| IPC主分类号 | C12N11/18 |
| 权利人 | 杭州师范大学 |
| 发明人 | 王安明; 陈浩民; 罗智愿 |
| 地址 | 浙江省杭州市余杭区余杭塘路2318号 |
专利主权项内容
1.一种氨基微球有序固定多酶的方法，包括以下几个步骤：(1)、制备多孔氨基化固定化载体；(2)、在聚磷酸激酶PPK上分别融合DogTag与QTag、在岩藻糖基转移酶FucT2上分别融合DogCatcher与SpyCatcher、在GDP-岩藻糖焦磷酸化酶Fkp上融合SpyTag，得到融合蛋白QT-PPK-DT，SC-FucT2-DC，Fkp-ST；(3)、往步骤(1)的多孔氨基化固定化载体中加入步骤(2)的QT-PPK-DC融合蛋白，并加入谷氨酰胺转胺酶MTG，使QT-PPK-DT融合酶蛋白上的QTag与多孔氨基化固定化载体上的氨基树脂发生反应进行特异性固定；(4)、将步骤(3)得到的产物重新分散到步骤(2)的SC-FucT2-DC融合蛋白中，使QT-PPK-DT上的DogTag和SC-FucT2-DC上的DogCatcher进行生物正交，实现对第二个酶蛋白的固定；(5)、将步骤(4)得到的产物重新分散到步骤(2)中得到的Fkp-ST融合蛋白中，使SC-FucT2-DC上的SpyCatcher与Fkp-ST上的SpyTag进行生物正交，实现在固定化载体上形成三酶有序固定涂层；所述的聚磷酸激酶来源于土拉伦氏弗朗西斯菌(Francisella tularensis)；所述的岩藻糖基转移酶来源于嗜热链球菌(Thermosynechococcus vestitus)；所述的GDP-岩藻糖焦磷酸化酶来源于脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)；所述的谷氨酰胺转氨酶来源于茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)；所述DogCatcher的编码基因序列如SEQ ID No.5所示；所述DogTag的编码基因序列如SEQ ID No.6；所述SpyCatcher的编码基因序列如SEQ ID No.7；所述SpyTag的编码基因序列如SEQ ID No.8和所述Qtag的编码基因序列如SEQ ID No.9所示。