质粒及PV蛋白酶抑制剂筛选及药效评价的方法
摘要文本
本发明公开了质粒及PV蛋白酶抑制剂筛选及药效评价的方法，在GFP中插入脊髓灰质炎病毒的3C蛋白酶相关裂解位点的序列，形成改造后的GFP报告蛋白，在上述改造后的GFP报告蛋白质粒上，克隆表达脊髓灰质炎病毒蛋白酶，可用于检测3C蛋白酶活性以及蛋白酶相关抑制剂活性，最终形成脊髓灰质炎病毒蛋白酶抑制剂筛选及药效评价平台。本发明能有效克服其他蛋白酶抑制剂筛选及活性评价方法的缺点，同时能够避免使用脊髓灰质炎病毒活病毒引发的安全性顾虑，对生物安全等级要求低，BSL‑1级实验室即可满足实验要求，是高效、准确、稳定、高通量、可重复的用于脊髓灰质炎病毒蛋白酶抑制剂筛选及药效评价平台。 （更多数据，详见马克数据网）
申请人信息
- 申请人:浙江迪福润丝生物科技有限公司
- 申请人地址:310000 浙江省杭州市滨江区长河街道滨安路688号2幢C楼6层601室
- 发明人: 浙江迪福润丝生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 质粒及PV蛋白酶抑制剂筛选及药效评价的方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311362594.6 |
| 申请日 | 2023/10/20 |
| 公告号 | CN117089576B |
| 公开日 | 2024/2/6 |
| IPC主分类号 | C12N15/85 |
| 权利人 | 浙江迪福润丝生物科技有限公司 |
| 发明人 | 武小琰; 潜奕青; 方晨捷; 周毓绚; 宋家升 |
| 地址 | 浙江省杭州市滨江区长河街道滨安路688号2幢C楼6层601室 |
专利主权项内容
1.一种可用于检测脊髓灰质炎病毒蛋白酶抑制剂活性的质粒，其特征在于，所述质粒包含改造的GFP荧光蛋白的编码核苷酸序列以及脊髓灰质炎病毒蛋白酶的编码核苷酸序列，所述的改造的GFP荧光蛋白内部包含可被脊髓灰质炎病毒蛋白酶裂解的蛋白酶切割序列，所述可被脊髓灰质炎病毒蛋白酶裂解的蛋白酶切割序列插入于野生型GFP荧光蛋白的位置包括site1，site2或者site3，site1位于如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列的KQ和KN之间，site2位于如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列的EG和DT之间，site3位于如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的QK和NG之间；所述的脊髓灰质炎病毒蛋白酶为3C；所述的脊髓灰质炎病毒蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述蛋白酶切割序列为cut1如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或者cut2如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，且所述蛋白酶切割序列cut1插入野生型GFP荧光蛋白的位置为site1或site3，所述蛋白酶切割序列cut2插入野生型GFP荧光蛋白的位置为site1，site2或者site3；所述的野生型GFP荧光蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。