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EV71蛋白酶抑制剂的筛选方法和抑制效果评价方法
摘要文本
本发明公开了一种EV71蛋白酶抑制剂的筛选方法和抑制效果评价方法，在荧光蛋白中插入EV71的3C蛋白酶相关裂解位点的序列，形成改造后的荧光蛋白报告蛋白，在该荧光蛋白报告蛋白质粒上，克隆表达EV71 3C蛋白酶，可用于筛选蛋白酶抑制剂以及对蛋白酶抑制剂活性的评价，最终形成EV71蛋白酶抑制剂筛选及药效评价平台。本发明能够避免使用EV71活病毒引发的安全性顾虑，对生物安全等级要求低，BSL‑1级实验室即可满足实验要求，高效、准确、稳定、高通量、可重复的用于EV71蛋白酶抑制剂筛选及药效评价。
申请人信息
- 申请人:浙江迪福润丝生物科技有限公司
- 申请人地址:310000 浙江省杭州市滨江区长河街道滨安路688号2幢C楼6层601室
- 发明人: 浙江迪福润丝生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | EV71蛋白酶抑制剂的筛选方法和抑制效果评价方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311360921.4 |
| 申请日 | 2023/10/20 |
| 公告号 | CN117106851B |
| 公开日 | 2024/2/6 |
| IPC主分类号 | C12Q1/37 |
| 权利人 | 浙江迪福润丝生物科技有限公司 |
| 发明人 | 孙慧敏; 余飞; 欧阳歆; 方晨捷; 宋家升 |
| 地址 | 浙江省杭州市滨江区长河街道滨安路688号2幢C楼6层601室 |
专利主权项内容
1.一种EV71蛋白酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建共表达改造的GFP和EV71 3C蛋白酶的质粒，所述改造的GFP为在野生型GFP上插入EV71 3C蛋白酶切割序列而成；(2)筛选：将待转染细胞铺于多孔板中，然后加入共表达改造的GFP和EV71 3C蛋白酶的质粒进行转染，对转染后的细胞进行培养，同时向多孔板中添加不同组的待筛选抑制剂，以不添加待筛选抑制剂的为对照，观察细胞状态及荧光拍照，并检测荧光强度；若与对照相比荧光强度增加，则表示待筛选抑制剂具有抑制效果，荧光强度增加越多则代表待筛选抑制剂的抑制效果越强；EV71 3C蛋白酶切割序列在野生型GFP氨基酸序列上的插入位点选自位点A、位点B和位点C；位点A为野生型GFP氨基酸序列第158~159位氨基酸；位点B为野生型GFP氨基酸序列第117~118位氨基酸；位点C为野生型GFP氨基酸序列第159~160位氨基酸；所述野生型GFP氨基酸序列见SEQ ID No.1所示；EV71 3C蛋白酶切割序列选自cut1、cut2，cut1氨基酸序列见SEQ ID No.2所示，cut2氨基酸序列见SEQ ID No.3所示。