一种纳米酶结合适配体检测食品中大肠杆菌的方法
摘要文本
本发明涉及化学分析检测技术领域，具体为一种纳米酶结合适配体检测食品中大肠杆菌的方法。本发明采用多壁碳纳米管及磷钼酸修饰四氧化三铁，具有氧空位的优异过氧化酶模拟酶Fe3O4@MWCNTs/Mo。纳米酶对大肠杆菌(E.coli)的强抗菌作用，能将E.coli杀死。活E.coli细胞壁表面电荷为负，当E.coli死亡后，表面结构发生改变，Fe3O4@MWCNTs/Mo与E.coli亲和力增强，活性位点降低，过氧化物酶活性被抑制。Fe3O4@MWCNTs/Mo与大肠杆菌适配体的复合物氧化3, 3', 5, 5'‑四甲基联苯胺(TMB)时，E.coli浓度与氧化型TMB(oxTMB)吸光度呈线性降低，建立E.coli检测新方法，检出限1 CFU/mL，检测时间仅需40min。本检测技术具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。
申请人信息
- 申请人:云南伦扬科技有限公司
- 申请人地址:650100 云南省昆明市高新区科园路101号细胞产业集群创新园第5层B区B5-01
- 发明人: 云南伦扬科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种纳米酶结合适配体检测食品中大肠杆菌的方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202410136540.6 |
| 申请日 | 2024/1/31 |
| 公告号 | CN117686711A |
| 公开日 | 2024/3/12 |
| IPC主分类号 | G01N33/569 |
| 权利人 | 云南伦扬科技有限公司 |
| 发明人 | 杨亚玲; 李秋兰; 杨德志 |
| 地址 | 云南省昆明市高新区科园路101号细胞产业集群创新园第5层B区B5-01 |
专利主权项内容
1.一种纳米酶结合适配体检测食品中大肠杆菌的方法，包括以下步骤：(1)将0.10-0.20 g 多壁碳纳米管(MWCNT)加入到30-50 mL乙二醇和10-20 mL聚乙二醇400的混合物中，再加入1.35-1.50 g FeCl·6HO，1.35-1.50 g乙酸钠和0.30-0.40 g磷钼酸，搅拌1-2 h；转移至聚四氟乙烯罐中，放入马弗炉，200 ℃下加热12-14 h，冷却至室温，用纯净水和乙醇交替洗涤3次，得到具有磁性的纳米酶FeO@MWCNTs/Mo；3234(2)大肠杆菌()适配体与FeO@MWCNTs/Mo在37℃恒温箱中孵育25-30 min，制得纳米酶与适配体复合物；E.coli34(3)分别在不同梯度浓度的中加入纳米酶与适配体复合物溶液，Na和Mg的混合溶液，然后加入3, 3', 5, 5'-四甲基联苯胺(TMB)溶液及HO，生成蓝色oxTMB，用pH 4.0醋酸盐缓冲溶液定容至4 mL，摇匀，静置5-10 min，磁铁分离FeO@MWCNTs/Mo，取上清液，测定吸光度，确定浓度与吸光度A的线性关系；E.coli+2+2234E.coli(4)取含的待测样品液与纳米酶与适配体复合物溶液，加入Na和Mg的混合溶液、TMB及HO溶液反应，磁铁分离，紫外光度计进行吸光度检测，根据吸光度计算待测样品液中浓度。E.coli+2+22E.coli