CRISPR/Cas9纳米抗菌剂及其制备方法
摘要文本
本发明公开了CRISPR/Cas9纳米抗菌剂及其制备方法，CRISPR/Cas9纳米抗菌剂包括：纳米载体和CRISPR/Cas9。CRISPR/Cas9纳米抗菌剂的制备方法，包括以下步骤：将阳离子脂质体和细菌外膜囊泡混合，探头超声融合后通过0.22μm滤膜除去杂质，加入CRISPR/Cas9质粒电致孔1～5次，得CRISPR/Cas9纳米抗菌剂。本发明制备的抗菌剂通过引起细菌基因组DNA双链断裂杀菌，不产生耐药性，抗耐药菌效果好。
申请人信息
- 申请人:中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
- 申请人地址:100850 北京市海淀区太平路27号
- 发明人: 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | CRISPR/Cas9纳米抗菌剂及其制备方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202410167086.0 |
| 申请日 | 2024/2/6 |
| 公告号 | CN117695410A |
| 公开日 | 2024/3/15 |
| IPC主分类号 | A61K48/00 |
| 权利人 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 发明人 | 金义光; 贾学丽; 袁伯川; 杜丽娜 |
| 地址 | 北京市海淀区太平路27号 |
专利主权项内容
马 克 数 据 网 1.CRISPR/Cas9纳米抗菌剂，其特征在于，包括：纳米载体和CRISPR/Cas9；其中，所述CRISPR/Cas9的形式为质粒DNA；CRISPR/Cas9质粒DNA的构建方法为：pBECAb-apr质粒经BsaI和AgeI酶切得到质粒骨架，所述pBECAb-apr质粒的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；通过寡核苷酸引物MCS-P-F，MCS-P-R梯度退火和磷酸化，获得具有BsaI、AgeI和AflII酶切位点的J23119启动子片段；将质粒骨架和J23119启动子片段通过T4连接酶连接，得到pBECAb-J23119，所述pBECAb-J23119的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；将Cas9核酸酶基因克隆到pUC质粒中，获得pUC-kan -Cas9质粒，Cas9核酸酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述pUC- kan -Cas9质粒的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；使用分别包含AgeI和AflII位点的引物从pUC-kan-Cas9质粒中扩增出Cas9核酸酶基因片段；pBECAb-J23119和Cas9核酸酶基因片段经AgeI和AflII酶切后连接得到pABsgRNA，所述pABsgRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；寡核苷酸引物进行梯度退火和磷酸化得到具有粘性末端的sgRNA片段；然后用BsaI酶切pABsgRNA后用T4 DNA连接酶将其与sgRNA片段连接，得到CRISPR/Cas9质粒DNA，所述CRISPR/Cas9质粒DNA的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；所述纳米载体为脂质/细菌外膜杂化囊泡。