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一种通过甲基苹果酸途径生产异亮氨酸的罗尔斯通氏菌工程菌株及其构建与生产方法
摘要文本
本发明属于生物技术领域，涉及一种通过甲基苹果酸途径生产异亮氨酸的罗尔斯通氏菌工程菌株及其构建与生产方法。本发明通过表达甲基苹果酸合酶基因建立甲基苹果酸途径合成异亮氨酸；通过改造内源N‑乙酰葡糖胺转运系统实现菌株对葡萄糖的转运代谢；通过表达支链氨基酸外泌蛋白基因实现异亮氨酸在发酵液中的累积。通过调节辅酶平衡、解除反馈抑制、敲除代谢旁路、采用补料上罐发酵显著提升工程菌株通过甲基苹果酸途径合成异亮氨酸的生产能力。工程菌株以葡萄糖作为唯一碳源，发酵36小时的异亮氨酸产量为857 mg/L，以CO2作为唯一碳源，发酵25天的异亮氨酸产量为105 mg/L。
申请人信息
- 申请人:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
- 申请人地址:100193 北京市海淀区圆明园西路2号
- 发明人: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种通过甲基苹果酸途径生产异亮氨酸的罗尔斯通氏菌工程菌株及其构建与生产方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202410145497.X |
| 申请日 | 2024/2/2 |
| 公告号 | CN117683802A |
| 公开日 | 2024/3/12 |
| IPC主分类号 | C12N15/74 |
| 权利人 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 发明人 | 张杰; 王雷; 黄火清; 苏小运; 姚斌; 罗会颖; 柏映国; 王晓璐; 涂涛; 秦星; 王苑; 王亚茹 |
| 地址 | 北京市海淀区圆明园西路2号 |
专利主权项内容
1.一种构建通过甲基苹果酸途径生产异亮氨酸的罗尔斯通氏菌工程菌株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：改造野生型罗尔斯通氏菌菌株的内源N-乙酰葡糖胺转运系统，包括步骤：将野生型罗尔斯通氏菌菌株的基于磷酸转移酶系统的N-乙酰葡糖胺转运蛋白基因的第793位碱基从G突变为C，突变后的N-乙酰葡糖胺转运蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，并敲除所述N-乙酰葡糖胺转运蛋白的转录调节蛋白基因，所述转录调节蛋白基因核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；nagEnagEnagRnagR的在野生型罗尔斯通氏菌菌株中表达甲基苹果酸合酶基因与支链氨基酸外泌蛋白基因和，其中，所述甲基苹果酸合酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述支链氨基酸外泌蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述支链氨基酸外泌蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。cimAygaZygaHcimAygaZygaH