测定人血清中万古霉素和降解产物浓度的方法
申请人信息
- 申请人:复旦大学附属华山医院
- 申请人地址:200040 上海市乌鲁木齐中路12号
- 发明人: 复旦大学附属华山医院
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 测定人血清中万古霉素和降解产物浓度的方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN201811272243.5 |
| 申请日 | 2018年10月26日 |
| 公告号 | CN111103363B |
| 公开日 | 2024年3月22日 |
| IPC主分类号 | G01N30/02 |
| 权利人 | 复旦大学附属华山医院 |
| 发明人 | 范亚新; 陈渊成; 张菁; 郁继诚; 彭小林 |
| 地址 | 上海市静安区乌鲁木齐中路12号 |
摘要文本
复旦大学附属华山医院取得“一种透气窗帘布”专利技术，本发明属药物浓度监测技术领域，涉及一种液相色谱‑串联质谱法LC‑MS/MS同时测定人血清中万古霉素和晶状降解产物CDP‑1的浓度的方法。本方法以去甲万古霉素为内标，采用甲酸酸化血清后加入定量的乙腈沉淀蛋白，以乙腈和甲酸水作为流动相，通过LC‑MS/MS法测定人血清万古霉素和CDP‑1的浓度。本方法样品取样量少，预处理简单、快速，可用于常规临床患者血清样本中万古霉素和降解产物CDP‑1的浓度测定，尤其可定量肾功能不全患者血液透析后产生不同程度CDP‑1而降低抗菌活性成分万古霉素浓度，能为临床制定和调整万古霉素个体化给药方案，能提高临床疗效和细菌清除率，降低细菌耐药性产生，降低肾毒性等毒副反应的发生。
专利主权项内容
1.测定人血清中万古霉素和降解产物CDP-1浓度的方法，其特征在于，采用高效液相色谱-紫外法测定CDP-1标准品中CDP-1-m，万古霉素和CDP-1-M的含量；采用万古霉素纯品和降解产物CDP-1标准品，配制相应比例的万古霉素和降解产物标准曲线及质控样品；待测样品经预处理后，经酸性流动相在色谱柱上分离，用三重四级杆质谱仪检测，包括以下步骤：1)CDP-1标准品中CDP-1-m、CDP-1-M和万古霉素的含量测定采用CDP-1的标准品，采用通用型的C18液相色谱柱，高效液相系统采用通用型高压泵、进样器和紫外检测器，采用乙腈：含0.023%磷酸的5mM磷酸二氢钾缓冲液为9 : 91作为流动相，等度洗脱，进样体积20μL，分析时间30min，平行6样本，紫外吸收波长230nm，获得相应的色谱峰面积，与万古霉素纯品进样结果对比后，以各自的色谱峰面积/总峰面积计算含量，取其平均值作为CDP-1标准品中CDP-1-m、CDP-1-M和万古霉素的含量；2)血清样品预处理取待测样品于离心管中，加入内标工作液、10%甲酸水溶液，混匀，加入定量的乙腈沉淀蛋白，13000 rpm离心分钟后，吸取定量上清液，加入5%的乙腈水溶液，混匀待测；3)样品分离采用Waters Acquity BEH C18色谱柱，2.1×100mm，1.7μm，液相色谱系统为超高压高分辨率计量泵、控温柱温箱和自动进样器，采用乙腈和0.1%甲酸溶液作为流动相，梯度洗脱；4)样品检测采用通用型串联质谱检测器检测样品中万古霉素、CDP-1和内标的峰面积；质谱电离方式：电喷雾电离源；扫描方式：多反应监测正离子模式；CDP-1采用与万古霉素相同的离子通道： 726.2→ 144.2，内标采用的离子通道： 718.2→144.2；m/z m/zm/zm/z5)浓度计算以样品浓度为X轴，待测物峰面积与内标峰面积比值为Y轴，进行加权回归分析，标准曲线回归方程以及样品的浓度使用含量分析软件进行计算。