一种EP来源的iPSC细胞
申请人信息
- 申请人:艾尔普再生医学科技(深圳)有限公司
- 申请人地址:518110 广东省深圳市龙华区龙华街道玉翠社区华韵路1号金博龙工业厂区厂房E709B
- 发明人: 艾尔普再生医学科技(深圳)有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种EP来源的iPSC细胞 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202210897394.X |
| 申请日 | 2022/7/28 |
| 公告号 | CN115261328B |
| 公开日 | 2024/1/9 |
| IPC主分类号 | C12N5/10 |
| 权利人 | 艾尔普再生医学科技(深圳)有限公司 |
| 发明人 | 李林; 葛文雪; 陈涛涛; 王嘉显 |
| 地址 | 广东省深圳市龙华区龙华街道玉翠社区华韵路1号金博龙工业厂区厂房E709B |
摘要文本
本发明属于重编程技术领域，涉及一种EP来源的iPSC细胞，iPSC获取方式包括：选择用于重编程iPSC的EP细胞；建立重编程用质粒组合，所述质粒组合选择质粒组合A或质粒组合B；采用电转的方式将质粒组合导入EP细胞；培养经过电转导入质粒组合后的EP细胞直至获得目标数量的iPSC细胞。本申请通过有效的质粒组合与质粒组合用量的设计，既保证重编程的效率、又保证所获得的iPSC细胞质量稳定。
专利主权项内容
1.一种EP来源的iPSC的制备方法，其特征在于，所述iPSC采用如下工艺步骤获得：选择用于重编程iPSC的EP细胞；建立重编程用质粒组合，所述质粒组合选择质粒组合A或质粒组合B；采用电转的方式将质粒组合导入EP细胞；培养经过电转导入质粒组合后的EP细胞直至获得目标数量的iPSC；其中，所述质粒组合A的组分为：质粒一：pCXLE-EF1α-OCT4-T2A-SOX2，插入基因有OCT4与SOX2；质粒二：pCEP4-EF1α-LMYC-T2A-KLF4，插入基因有LMYC与KLF4；质粒三：pCEP4-EF1α-NANOG-T2A-LIN28，插入基因有NANOG与LIN28；质粒组合中，质粒一的用量0.15μg-2.6μg；质粒二的用量0.15μg-2.6μg；质粒三的用量0.1μg-2.4μg；并且，质粒一的用量与质粒二的用量均大于质粒三的用量；所述质粒组合B的组分为：质粒四：pCEP4-EF1α-OCT4-T2A-SOX2-T2A-KLF4-IRES-LIN28，插入基因有OCT4、SOX2、KLF4与LIN28；质粒五：pCEP4-EF1α-OCT4-T2A-SOX2-T2A-KLF4-IRES-NANOG，插入基因有OCT4、SOX2、KLF4与NANOG；质粒六：pCEP4-EF1α-OCT4-T2A-SOX2-T2A-KLF4-IRES-SV40LT，插入基因有OCT4、SOX2、KLF4与SV40LT；质粒组合中，质粒四的用量0.1μg-2.6μg；质粒五的用量0.1μg-2.6μg；质粒六的用量0.1μg-2.6μg；培养经过电转导入质粒组合后的EP细胞直至获得目标数量的iPSC包括：向EP细胞中导入质粒组合后，加入EP培养基、混匀细胞；放置于细胞培养箱，并再次混匀细胞；自DAY2起每天持续向电转后培养基中每孔补充EP培养基，并添加CHIR99021至终浓度为0.1uM-3uM；自DAY3起每天持续向电转后培养基中每孔补充E8培养基；直至DAY6全换液，每孔补E8培养基，继续每天换液，观察iPSC克隆的出现；所述EP细胞来源于PBMC，并选用分化至第9-15天的EP细胞。