一种芦笋超雄株的快速鉴定与繁殖方法
申请人信息
- 申请人:南京农业大学
- 申请人地址:210095 江苏省南京市卫岗1号南京农业大学园艺学院
- 发明人: 南京农业大学
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种芦笋超雄株的快速鉴定与繁殖方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202211679868.X |
| 申请日 | 2022/12/26 |
| 公告号 | CN117461560A |
| 公开日 | 2024/1/30 |
| IPC主分类号 | A01H4/00 |
| 权利人 | 南京农业大学 |
| 发明人 | 柳李旺; 赵福素; 崔峰; 徐良; 王燕; 赵博雅; 刘宝阳 |
| 地址 | 江苏省南京市玄武区卫岗1号 |
摘要文本
（来 自 专利查询网） 本发明公开了一种快速鉴定与繁殖芦笋超雄株的方法，属于蔬菜作物遗传育种技术领域。该方法基于芦笋基因组序列，开发出可以快速鉴定芦笋超雄株的分子标记，设计相应的引物(命名为Asp‑YY01F，Asp‑YY01R)进行PCR扩增，即可准确鉴定出超雄株；进而以嫩茎为外植体，通过愈伤组织诱导(MS+1.0mg/L 6‑BA+0.75 mg/L NAA+30g/L蔗糖)、不定芽(MS+2.0 mg/L 6‑BA+0.05 mg/L NAA+30g/L蔗糖)和不定根分化(1/2 MS+1.0 mg/L IBA+0.02 mg/L KT+0.5 g/L AC+30g/L蔗糖)，建立了相应的离体高频再生体系，可实现芦笋超雄株快速繁殖。本发明提供的分子标记能精准辨别超雄株和普通雄株，可用于植株苗期性别鉴定、全雄育种F1代种子纯度检测；超雄株离体再生繁殖系数高，性状稳定，可为芦笋全雄育种工作提供重要种质材料，加快芦笋全雄育种进程。
专利主权项内容
1.一种芦笋超雄株的快速鉴定与繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、基因组DNA提取：取不同性别类型的芦笋植株材料幼叶或嫩芽，采用改良的CTAB法提取基因组DNA；步骤2、PCR扩增：以芦笋基因组DNA为模板、使用共显性标记引物Asp-YY01进行PCR扩增；步骤3、凝胶电泳：利用6％聚丙烯酰氨凝胶(PAGE)电泳进行PCR产物检测，凝胶条带清晰显影后拍照保存。步骤4、结果分析：普通雄株扩增出226bp和200bp两条条带，超雄株仅扩增出较长的条带(226bp)，雌株仅扩增出较短的条带(200bp)，性别检测结果与田间花朵类型鉴别一致。步骤5、外植体预处理：选取芦笋超雄株新生嫩茎作为外植体，剥去嫩茎上的鳞片，流水冲洗后用酒精和次氯酸钠消毒灭菌，于无菌滤纸上晾干备用。步骤6、愈伤组织诱导：用解剖刀将晾干后的嫩茎切成0.5～1.0cm长的茎段并纵剖成两半，接种于愈伤组织诱导培养基中，进行愈伤组织诱导。步骤7、不定芽诱导：将生长状态好的愈伤组织转移至愈伤分化培养基中，进行不定芽的诱导。步骤8、不定根诱导：切取生长健壮的不定芽，竖直接种于生根培养基中，进行不定根诱导。步骤9、炼苗移栽：待新生植株根系发达、茎叶生长状态良好时进行炼苗移栽。将组培瓶盖打开，加水没过培养基，于组培室内放置2～3d进行炼苗，随后用自来水洗净根部培养基，移栽至基质培养。。来自：