一种可诱导小胶质细胞剔除小鼠模型的构建方法和应用
申请人信息
- 申请人:上海实验动物研究中心
- 申请人地址:201203 上海市浦东新区金科路3577号
- 发明人: 上海实验动物研究中心
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种可诱导小胶质细胞剔除小鼠模型的构建方法和应用 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311307063.7 |
| 申请日 | 2023/10/10 |
| 公告号 | CN117778464A |
| 公开日 | 2024/3/29 |
| IPC主分类号 | |
| 权利人 | 上海实验动物研究中心 |
| 发明人 | 沈如凌; 郭洋; 范春 |
| 地址 | 上海市浦东新区金科路3577号 |
摘要文本
上海实验动物研究中心获取“一种透气窗帘布”专利技术，本发明属于生物技术领域，具体涉及一种可诱导小胶质细胞剔除小鼠模型的构建方法和应用。公开了了一种可诱导小胶质细胞缺陷小鼠模型的构建方法，利用筛选到的高活性gRNA靶位点，基于CRISPR/Cas9系统介导的同源重组构建Tmem119‑DTR小鼠模型；发明人对该模型小胶质细胞tdTomato荧光表达，白喉毒素对小胶质细胞的可诱导性杀伤进而造成的小胶质细胞缺陷进行了验证，该模型可以应用于特定生理、病理条件下的小胶质细胞功能研究等领域。
专利主权项内容
1.一种构建可诱导性小胶质细胞剔除小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法具体包括以下步骤：a.gRNA靶位点筛选：筛选得到低脱靶风险的gRNA靶位点，所述gRNA靶位点的序列信息如SEQ ID NO : 1所示；b.同源重组载体构建，根据获得的gRNA位点及插入位点信息，构建同源重组载体；Ⅰ.构建基因敲入片段：通过全基因合成2A肽、红色荧光蛋白、2A肽和白喉毒素受体，其序列信息依次如SEQ ID NO : 3-6所示，并按照从左到右依次连接构建得到基因敲入片段；Ⅱ.构建重组左臂和重组右臂：以小鼠基因组为模板，通过PCR扩增得到重组左臂的序列如SEQ ID NO : 2所示，重组右臂的序列如SEQ ID NO : 7所示；Ⅲ.构建Tmem119-DTR同源重组载体：将重组左臂、基因敲入片段和重组右臂连入质粒载体，获得Tmem119-DTR同源重组载体；c.Tmem119-DTR基因敲入小鼠构建：取成熟小鼠的受精卵，将Tmem119-DTR同源重组载体、Cas9 mRNA和gRNA混合后注射进入受精卵，注射后的受精卵移植至受体母鼠的输卵管，获得基因修饰小鼠F0代小鼠；待F0代小鼠成年后与野生型小鼠交配，获得F1代小鼠，利用引物对对小鼠F0代小鼠和F1代小鼠中重组左臂和重组右臂进行PCR鉴定，鉴定得到重组阳性小鼠。 （更多数据，详见马克数据网）