太平洋牡蛎四倍体精子的超低温冻存和激活方法
申请人信息
- 申请人:鲁东大学; 烟台海育海洋科技有限公司
- 申请人地址:264025 山东省烟台市芝罘区红旗中路184号
- 发明人: 鲁东大学; 烟台海育海洋科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 太平洋牡蛎四倍体精子的超低温冻存和激活方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311682478.2 |
| 申请日 | 2023/12/8 |
| 公告号 | CN117378599B |
| 公开日 | 2024/3/12 |
| IPC主分类号 | A01N1/02 |
| 权利人 | 鲁东大学; 烟台海育海洋科技有限公司 |
| 发明人 | 徐晓辉; 杨建敏; 王卫军; 孙国华; 冯艳微; 李赞; 李彬; 骆启豪; 李妍 |
| 地址 | 山东省烟台市芝罘区红旗中路186号; |
摘要文本
本发明公开了一种太平洋牡蛎四倍体精子的超低温冻存和激活方法，属于精子超低温保存技术领域。其中，本发明采用液氮面直接降温的方法冻存四倍体精子，操作简便、效率高，适宜大规模冻存精子，完全可以满足实际生产的需要；本发明采用二步升温的方法复苏冻存的四倍体精子，冻存的精子温度在30s内即可迅速达到25℃，有效防止了因冰晶生成而引起的细胞损伤。在冻存四倍体精子时，使用了由基础液、质膜保护剂和微管稳定剂组成的精子冷冻保存液，有效保护了四倍体精子；在激活四倍体精子时，使用了由基础液、钙镁离子和二甲双胍组成的精子激活液，有效保证了四倍体精子的活力。
专利主权项内容
1.一种太平洋牡蛎四倍体精子的超低温冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1：挑选肥满且精子活跃度佳的四倍体太平洋牡蛎置于4℃冷藏；Step2：用蒸馏水配制基础液，各物质的浓度分别如下：NaCl 8g/L，KCl 0.4g/L，NaHPO·2HO 0.1g/L，KHPO 0.1g/L，NaHPO·HO 0.1g/L，NaHCO 0.35g/L；242242423Step3：用基础液配制精子冷冻保存液，各物质的浓度分别如下：肌肽 5.0mmol/L，脯氨酸 50mmol/L，6-DMAP 1.5mmol/L；Step4：用基础液配制精子激活液，各物质的浓度分别如下：CaCl 0.14g/L，MgSO·7HO 0.20g/L，二甲双胍 300μmol/L；242Step5：将四倍体太平洋牡蛎的雄性生殖腺挤成浆状，除杂后置于冻存管中，并向冻存管中加入预冷的精子冷冻保存液，混匀后4℃平衡20min；Step6：向保温罐中加入液氮，将装有四倍体精子的冻存管置于保温罐中，熏蒸20min；Step7：向保温罐中继续加入液氮，再熏蒸10min；Step8：打开保温盖，迅速将冻存管从保温罐中取出并装入液氮罐中存储。 来源：马 克 数 据 网