一种利用液相芯片同时检测生鲜乳中16种致病微生物的方法
申请人信息
- 申请人:中国动物卫生与流行病学中心
- 申请人地址:266032 山东省青岛市南京路369号
- 发明人: 中国动物卫生与流行病学中心
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种利用液相芯片同时检测生鲜乳中16种致病微生物的方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311613021.6 |
| 申请日 | 2023/11/29 |
| 公告号 | CN117535434A |
| 公开日 | 2024/2/9 |
| IPC主分类号 | C12Q1/689 |
| 权利人 | 中国动物卫生与流行病学中心 |
| 发明人 | 王君玮; 赵格; 肖沙; 赵建梅; 徐莹; 张喜悦; 刘俊辉; 刘娜; 宋时萍 |
| 地址 | 山东省青岛市南京路369号 |
摘要文本
本发明涉及生物技术领域。本发明提供了一种利用液相芯片同时检测生鲜乳中16种致病微生物的方法和试剂盒，分别设计针对不同菌株序列的特异性上游引物、特异性下游引物、探针以及微球，然后利用多重PCR扩增后获得的多重PCR产物与带微球探针的液相芯片工作液混合、杂交，再与SAPE进行孵育后，上机依据检测到的微球荧光编码和微球上报告分子荧光强度MFI值来判定致病微生物类别及其检出量。本发明检测方法需样本量少，可以实现快速、高灵敏度、高特异性、高通量的多重致病微生物检测；可以为生鲜乳质量安全的实验室检验提供新的方法选择，更好的保证产品的质量安全和人们的饮食安全。
专利主权项内容
1.一种利用液相芯片同时检测生鲜乳中16种致病微生物的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)分别设计针对志贺菌、炭疽芽孢杆菌、沙门菌、肉毒梭状芽孢杆菌、链球菌、蜡状芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌、霍乱弧菌、黄曲霉菌、单核细胞增生李斯特菌、致病性大肠杆菌、布鲁氏菌、阪崎肠杆菌、产气荚膜梭菌和弯曲杆菌的特异性上游引物、特异性下游引物和探针，然后对获得的特异性下游引物和探针进行修饰，在特异性下游引物的5’端加生物素，在探针的5’端加NH-C；212(2)取待测样本DNA序列作为模板，并利用相应上述特异性上游引物和修饰后特异性下游引物同时进行多重PCR扩增，得到多重PCR产物；(3)将步骤(1)修饰后探针与微球按照体积比(1-5) : 50进行偶联，获得液相芯片工作液；(4)将多重PCR产物与液相芯片工作液按照体积比(3-6) : 16混合、杂交后，再与SAPE进行孵育，在Luminex 200仪器上读取微球荧光编码和报告分子荧光中位数MFI值；参与计数的各荧光标记的微球均≥100个，各个荧光标记微球的阴性对照的MFI值＜100；根据读数进行结果判定：当样品的MFI值大于阴性对照的MFI的两倍标准差时结果判为阳性，当样品的MFI值小于阴性对照的MFI值的两倍标准差时结果判为阴性。TM