一种促进NK细胞分泌外泌体的提取方法与应用
申请人信息
- 申请人:东莞再立健生物科技有限公司
- 申请人地址:523808 广东省东莞市松山湖园区研发五路1号6栋701室
- 发明人: 东莞再立健生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种促进NK细胞分泌外泌体的提取方法与应用 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311754296.1 |
| 申请日 | 2023/12/20 |
| 公告号 | CN117431210A |
| 公开日 | 2024/1/23 |
| IPC主分类号 | C12N5/0783 |
| 权利人 | 东莞再立健生物科技有限公司 |
| 发明人 | 薛卫巍; 谢海涛; 谢炜豪; 钟家炜 |
| 地址 | 广东省东莞市松山湖园区研发五路1号6栋701室 |
摘要文本
本发明公开了一种促进NK细胞分泌外泌体的提取方法及其应用；其中，提取方法包括步骤：第0天，NK细胞接种于培养瓶中静置培养；第3至第19天，每隔几天更换一次细胞培养液，且每次收集倒出的培养废液并离心处理，独立收集每次离心获得的外泌体；第20天，停止培养，再次收集倒出的培养废液并离心处理，收集离心获得的外泌体。该外泌体提取工艺中，通过间歇性模拟体内免疫炎症反应的38℃温度，可以刺激NK细胞达到促炎作用，让NK细胞短期内提高细胞因子(如TNF‑α、IL‑1β、IL‑6)的分泌，以缩短适应新鲜培养基的时间，达到维持外泌体高浓度水平产出。
专利主权项内容
1.一种促进NK细胞分泌外泌体的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：第0天，在培养瓶中加入300ml的细胞培养液，并在培养瓶中接种5*10个NK细胞；随后将NK细胞置于环境为37℃、5v/v%CO条件下的培养箱中静置培养；其中，所述细胞培养液中包括基础培养基，在该基础培养基中添加有含终浓度为1000~2000IU/ml的IL-2、终浓度为10~50ng/ml的IL-15、终浓度为20~40ng/ml的SCF、终浓度为20~40ng/ml的TGF、终浓度为5~20ng/ml的PDGF、终浓度为2~5μM StemRegenin1及终浓度为0.1~3%的Ultroser G血清替代物；72第3天至第19天，每隔3天换液一次，收集每次换液倒出的培养回收液，随后每次补加500ml细胞培养液，摇匀后静置培养；其中，第3天至第19天的NK细胞培养中，首先在培养箱环境为38℃、5v/v%CO条件下静置培养6小时，其次在培养箱环境为37℃、5v/v%CO条件下继续静置培养；22第20天，停止NK细胞培养，收集培养瓶中倒出的培养回收液；其中，在第3天至第20天的NK细胞培养中，对每次收集到的培养回收液分别进行离心处理，每次离心停止后，将获得的外泌体分别存储于-20℃下，备用。 数据由马 克 团 队整理