一种羊源贾第虫PCR-RFLP基因分型方法
申请人信息
- 申请人:佛山科学技术学院
- 申请人地址:528200 广东省佛山市南海区狮山镇广云路33号
- 发明人: 佛山科学技术学院
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种羊源贾第虫PCR-RFLP基因分型方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311843111.4 |
| 申请日 | 2023/12/29 |
| 公告号 | CN117757969A |
| 公开日 | 2024/3/26 |
| IPC主分类号 | C12Q1/6893 |
| 权利人 | 佛山科学技术学院 |
| 发明人 | 余新刚; 王红彩; 张浩吉; 穆宣儒; 袁凯健; 李奕龙; 许辉 |
| 地址 | 广东省佛山市南海区狮山镇仙溪水库西路佛山科学技术学院 |
摘要文本
佛山科学技术学院获取“一种透气窗帘布”专利技术，本发明公开了一种羊源贾第虫PCR‑RFLP基因分型方法，该方法包括巢式PCR检测引物、特异性内切酶及其反应条件；引物根据十二指肠贾第虫β‑贾第素(beta‑giardin, bg)基因序列设计，引物序列分别如SEQ ID NO : 1‑SEQ ID NO : 4所示，该引物具有较高的特异性和稳定性；所采用的限制性内切酶为HinfI和Bgl I。本发明建立的基因分型方法可快速、准确鉴定羊源贾第虫的基因型，且适用于贾第虫A型、B型、E型、A/B/E集聚体混合感染、A/B集聚体混合感染、A/E集聚体混合感染、B/E集聚体混合感染的检测，比基因测序更节约检测成本和检测时间，且一般实验室均具备条件，可广泛应用于羊源贾第虫的基因分型和分子流行病学调查。
专利主权项内容
来自马-克-数-据 1.一种羊源贾第虫PCR-RFLP基因分型方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取羊粪便，使用粪便DNA提取试剂盒提取贾第虫DNA；S2、以提取的贾第虫DNA为初始模板，利用设计的如SEQ ID NO : 1-SEQ ID NO : 4所示的引物进行巢式PCR扩增贾第虫β-贾第素bg基因；S3、将巢式PCR扩增产物在1％琼脂糖凝胶电泳上进行检测，然后在蓝光切胶仪上切下目的片段，使用胶回收试剂盒进行纯化，得到纯化的bg基因的产物；S4、将纯化的bg基因产物与pMD18-T克隆载体连接，得到连接产物；S5、利用连接产物和感受态细胞DH5α构建重组质粒样品；S6、在超净工作台中，用枪头挑取重组质粒样品的白色单克隆菌落，接种于5mL含Amp抗性的LB液体培养基中，37℃，220rpm培养6-8h，取1μL培养过的菌液作为模板，利用设计的如SEQ ID NO : 3-SEQ ID NO : 4所示的引物进行PCR扩增，得到PCR产物；S7、选用HinfI和Bgl I限制性内切酶对PCR产物进行双酶切后，在1％琼脂糖凝胶电泳上进行检测，取出凝胶，并于紫外透射仪中观察酶切后基因片段，得到贾第虫基因型。