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一种在毕赤酵母中高效分泌表达全链长胶原蛋白的方法及其应用
申请人信息
- 申请人:肽源(广州)生物科技有限公司
- 申请人地址:511447 广东省广州市番禺区石楼镇嵩山路64号(E栋厂房)2楼201号
- 发明人: 肽源(广州)生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种在毕赤酵母中高效分泌表达全链长胶原蛋白的方法及其应用 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311741457.3 |
| 申请日 | 2023/12/15 |
| 公告号 | CN117701618A |
| 公开日 | 2024/3/15 |
| IPC主分类号 | C12N15/81 |
| 权利人 | 肽源(广州)生物科技有限公司 |
| 发明人 | 张齐; 梁清莲; 吴旭伟; 梁凤婷 |
| 地址 | 广东省广州市番禺区石楼镇嵩山路64号(E栋厂房)2楼201号 |
摘要文本
肽源(广州)生物科技有限公司获取“一种透气窗帘布”专利技术，本发明涉及一种在毕赤酵母中高效分泌表达全链长胶原蛋白的方法及其应用。包括以下过程：扩增III型胶原片段col3a1及载体片段pPIC9k，以无缝克隆的方式连接，获得载体pPIC9k‑col3a1，筛选毕赤酵母中超过100kDa分子量的分泌蛋白，将其信号肽序列与酿酒酵母α‑杂交因子前导肽融合，筛选出载体pPIC9K‑SigG‑col3a1，筛选分子伴侣表达载体pPICZaA‑SH1，将其导入GS115/pPIC9k‑SigG‑col3a1感受态细胞。本发明可用于全链长胶原蛋白的分泌表达，解决了大分子蛋白，尤其是含端肽胶原蛋白在毕赤酵母中难以分泌或者分泌量低的问题。
专利主权项内容
1.一种在毕赤酵母中高效分泌表达全链长胶原蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、PCR扩增获得胶原蛋白氨基酸序列对应的核苷酸序列与线性化载体片段pPIC9k；S2、利用无缝克隆将步骤S1获得的胶原蛋白氨基酸序列对应的核苷酸序列与线性化载体片段pPIC9k连接，获得重组载体；S3、搜集毕赤酵母自身超过100kDa分子量的分泌蛋白，通过将毕赤酵母自身信号肽与酿酒酵母α-杂交因子前导肽进行融合，筛选获得新的信号肽SigG；S4、将步骤S3获得的新的信号肽SigG与步骤S2所得重组载体以无缝克隆的方式插入替换信号肽部分，构建载体，利用SacII将载体线性化，进一步电转化导入GS115，筛选出感受态细胞；S5、构建分子伴侣表达载体pPICZaA-SH1，并将其导入步骤S4筛选出的感受态细胞中进行表达，即得。