一种血浆β-淀粉样蛋白检测方法
申请人信息
- 申请人:广东省中医院(广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院)
- 申请人地址:510120 广东省广州市越秀区大德路111号
- 发明人: 广东省中医院(广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院)
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种血浆β-淀粉样蛋白检测方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311425937.9 |
| 申请日 | 2023/10/31 |
| 公告号 | CN117471007A |
| 公开日 | 2024/1/30 |
| IPC主分类号 | G01N30/06 |
| 权利人 | 广东省中医院(广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院) |
| 发明人 | 张乔轩; 黄宪章; 展敏; 严君; 韩丽乔; 张鹏伟 |
| 地址 | 广东省广州市越秀区大德路111号 |
摘要文本
本发明提供了一种血浆β‑淀粉样蛋白检测方法，本发明方法以血浆Aβ42和Aβ40作为检测对象，选择Aβ40蛋白的特征肽段为肽段GAIIGLMVGGVV，Aβ42蛋白的特征肽段为肽段GAIIGLMVGGVVIA，肽段GAIIGLMVGGVV的定量子离子为968.56(b11+)，肽段GAIIGLMVGGVVIA的定量子离子为1067.63(b12+)，采用15N同位素标记的完整蛋白作为内标，通过免疫沉淀富集纯化样本，并酶解产生特征肽段，建立ID‑LC‑MS/MS靶向检测特征肽段的方法，从而实现血浆Aβ42和Aβ40的准确定量。本发明方法避免了血浆中与Aβ40和Aβ42众多结构相似的亚型对检测的干扰，有利于提高检测方法的准确度，并且特征肽段的质谱母离子、质谱子离子具有更强的响应信号，使得血浆β‑淀粉样蛋白检测方法的准确度、重复性、灵敏度更佳。
专利主权项内容
1.一种血浆β-淀粉样蛋白检测方法，其特征在于，所述血浆β-淀粉样蛋白检测方法检测的目标物为Aβ40蛋白、Aβ42蛋白；所述血浆β-淀粉样蛋白检测方法包括以下步骤：(1)将N-Aβ40蛋白和N-Aβ42蛋白作为内标与待测血浆样品混匀，混匀后两种内标的终浓度为80~120pg/mL；将加入内标的待测血浆样品与包被β-淀粉样蛋白N端特异性单克隆抗体的树脂磁珠混合得到混合体系a于25~30℃下孵育2~4小时；1515(2)去除混合体系a中的液体得到免疫沉淀的树脂磁珠，清洗免疫沉淀的树脂磁珠后对免疫沉淀的树脂磁珠进行洗脱，收集洗脱液；(3)去除步骤(2)得到的洗脱液中的溶剂，用碳酸氢铵溶液复溶后与定量胰蛋白酶混匀后进行酶解反应，加入终止剂终止酶解反应后得到样本a，将样本a除盐得到样本b；(4)将样本b进液相二级质谱仪检测Aβ40蛋白、Aβ42蛋白以及作为内标的N-Aβ40蛋白和N-Aβ42蛋白，以样本b中Aβ42蛋白和Aβ40蛋白的特征肽段在液相二级质谱仪中的信号定量Aβ40蛋白、Aβ42蛋白，其中Aβ40蛋白的特征肽段为肽段GAIIGLMVGGVV，Aβ42蛋白的特征肽段为肽段GAIIGLMVGGVVIA，内标N-Aβ40蛋白和N-Aβ42蛋白特征肽段分别为N标记的肽段N-[GAIIGLMVGGVV]、肽段N-[GAIIGLMVGGVVIA]，通过选择特征肽段在液相二级质谱仪中的母离子、子离子进行定性和定量，其中肽段GAIIGLMVGGVV的母离子为1085.64+，N-[GAIIGLMVGGVV]的母离子为1097.6+，肽段GAIIGLMVGGVVIA的母离子为635.38++，肽段N-[GAIIGLMVGGVVIA]的母离子为642.36++；151515151515151515所述肽段GAIIGLMVGGVV的子离子包括656.38(b7+)、755.45(b8+)、812.47(b9+)、869.49(b10+)和968.56(b11+)；所述肽段N-[GAIIGLMVGGVV]的子离子包括663.36(b7+)、763.42(b8+)、821.44(b9+)、879.46(b10+)、979.53(b11+)；15所述肽段GAIIGLMVGGVVIA的子离子包括656.38(b7+)、755.45(b8+)、812.47(b9+)、869.49(b10+)、968.56(b11+)、1067.63(b12+)、1180.71(b13+)；所述肽段N-[GAIIGLMVGGVVIA]的子离子包括663.36(b7+)，763.42(b8+)，821.44(b9+)，879.46(b10+)，979.53(b11+)，1079.59(b12+)，1193.67(b13+)。15