非诊断目的的Mpox病毒抗体中和活性FRNT检测方法
摘要文本
深圳市第三人民医院(深圳市肝病研究所); 深圳国家感染性疾病临床医学研究中心取得“一种透气窗帘布”专利技术，本发明属于分子生物学检测技术领域，公开了一种非诊断目的的Mpox病毒抗体中和活性FRNT检测方法，包括铺板、稀释待测样本、制备样本‑病毒混合物、感染、固定、破膜、加检测抗体、显色、扫描计数、计算中和活性。本发明的FRNT检测方法与现行的PRNT和CPE法相比，具有省时、高效、所需待测样本量少的优势。本发明的检测方法可通过检测血清中Mpox病毒中和抗体水平的高低评估Mpox疫苗免疫效果，有望应用于猴痘疫苗的研发。本发明还可评估Mpox病毒单克隆抗体的中和活性，可应用于猴痘单克隆中和抗体药物的研发，并为Mpox患者特异性体液免疫反应、预防性疫苗评价、中和抗体活性评价提供方法学支持。。
专利主权项内容
1.一种非诊断目的的Mpox病毒抗体中和活性FRNT检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)铺板：将易感细胞按1.0-3.0万个/孔的接种量接种于96孔板，置于培养箱中培养16-24小时；(2)稀释待测样本：在U型底96孔板内，用含有补体的维持培养基对待测样本进行2-5倍的倍比稀释，做6-10个稀释度，每个稀释度做2-3个复孔；(3)制备样本-病毒混合物：用维持培养基稀释Mpox病毒至2000-6000FFU/ml，向步骤(2)的孔板加入等体积稀释后的Mpox病毒，混匀后置于培养箱中培养1-2小时；(4)感染：弃步骤(1)96孔板内培养基，向其中加入步骤(3)制备的样本-病毒混合物100μL，然后置于培养箱中继续培养16-24小时；(5)固定：取出步骤(4)的96孔板，弃培养基后浸泡于固定液中，室温固定30-60分钟；(6)破膜：弃步骤(5)的96孔板中的固定液，每孔加入100-200μL破膜缓冲液，室温破膜10-20分钟；(7)加检测抗体：向每个孔中加入50-100μL经稀释后的Mpox病毒检测抗体，室温孵育2-4小时；(8)显色：向每个孔中加入50-100μL显色底物，室温显色5-10分钟；(9)扫描计数：用ELISpot读板仪扫描并计数；(10)计算中和活性：根据步骤(9)的计数结果，按公式(100-100×试验孔读值/病毒对照孔平均读值)计算每孔的中和活性，通过GraphPad Prism软件拟合中和曲线并计算半数抑制浓度。 来自马-克-数-据
专利申请信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 非诊断目的的Mpox病毒抗体中和活性FRNT检测方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311229723.4 |
| 申请日 | 2023/9/22 |
| 公告号 | CN117517653A |
| 公开日 | 2024/2/6 |
| IPC主分类号 | G01N33/569 |
| 权利人 | 深圳市第三人民医院(深圳市肝病研究所); 深圳国家感染性疾病临床医学研究中心 |
| 发明人 | 程林; 张政; 张明霞; 赵娟娟; 段美美 |
| 地址 | 广东省深圳市龙岗区布澜路29号; 广东省深圳市龙岗区南湾街道布澜路29号F栋22楼2208室和2209室 |