一种应用2A肽策略构建双功能酵母展示与分泌系统的方法
申请人信息
- 申请人:南京瑞源生物技术有限公司
- 申请人地址:210000 江苏省南京市栖霞区仙林街道齐民西路6号南京仙林智谷3C10楼1001室
- 发明人: 南京瑞源生物技术有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种应用2A肽策略构建双功能酵母展示与分泌系统的方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311847457.1 |
| 申请日 | 2023/12/29 |
| 公告号 | CN117487841B |
| 公开日 | 2024/3/22 |
| IPC主分类号 | C12N15/81 |
| 权利人 | 南京瑞源生物技术有限公司 |
| 发明人 | 柳曹枝; 陈雅琦 |
| 地址 | 江苏省南京市栖霞区仙林街道齐民西路6号南京仙林智谷3C10楼1001室 |
摘要文本
南京瑞源生物技术有限公司取得“一种透气窗帘布”专利技术，本发明公开了一种应用2A肽策略构建双功能酵母展示与分泌系统的方法，涉及2A肽策略构建双功能酵母技术领域，通过以绿色荧光蛋白为目的蛋白，将来源于口蹄疫病毒的2A肽序列插入pYD1质粒的Aga2表达盒中并与下游目的基因GFP的序列相连，构建重组质粒pYD1‑F2A‑GFP；将重组质粒转化至酵母菌株EBY100中，并通过阳性克隆筛选、目的蛋白诱导表达、提取与鉴定步骤，解决了传统的酵母展示系统中目的蛋白只能展示在细胞表面，不能同时分泌至培养基上清液中这一问题。
专利主权项内容
1.一种应用2A肽策略构建双功能酵母展示与分泌系统的方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：以绿色荧光蛋白为目的蛋白，将来源于口蹄疫病毒的F2A肽序列插入pYD1质粒的Aga2表达盒中并与下游目的基因GFP的序列相连，构建重组质粒pYD1-F2A-GFP，重组质粒如下图所示：
；将重组质粒转化至酵母菌株EBY100中，并通过阳性克隆筛选、目的蛋白诱导表达、提取与鉴定步骤，利用F2A肽自我剪切但不能每次均有效剪切的特性，构建出一种同时具有蛋白分泌及表面展示双功能的新型酵母展示系统；构建重组质粒的具体方式为：1)载体质粒线性化：采用NheI及MluI酶切pYD1载体，胶回收备用；50μl酶切体系如下：pYD1载体5μg；10×rCutSmartBuffer5μl；NheI1μl；MluI1μl；无菌水补至50μl；将试剂混合好，之后置于37℃水浴1h；2)目的片段同源重组：将目的片段与线性化载体混合，在同源重组酶的催化下进行同源重组反应，构建重组质粒pYD1-F2A-GFP；20μl同源重组体系如下：目的片段3μl；线性化质粒2μl；ExnaseII2μl；5×CEBuffer4μl；无菌水9μl；将上述试剂混合好后，置于37℃水浴2h；目的片段包括Flag标签序列、口蹄疫病毒的F2A肽序列及GFP序列。