具有免疫调控的复合细胞外泌体制剂的制备方法及其应用

专利主权项内容

1.一种具有免疫调控的复合细胞外泌体制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：辅助性T细胞培养：首先，从外周血中分离出PBMC，并筛选出CD4+T细胞；其次，用第一培养基培养CD4+T细胞5~6天，回收第一培养液并离心去除上清液，收集细胞沉淀，获得辅助性T细胞，备用；干细胞培养：首先，在所述辅助性T细胞培养至第3天时，取1×10个间充质干细胞用第二培养基培养2~3天，回收第二培养液中的上清液；其次，往回收上清液中加入消化液进行消化处理后收集细胞悬液；最后，对收集的细胞悬液离心，去上清液，收集沉淀物，获得干细胞，备用；7 细胞共培养：首先，将所述辅助性T细胞和干细胞混合后用第三培养基重悬，得到混合细胞悬液；其次，将混合细胞悬液中的混合细胞接种至培养器中并置于培养条件为37℃、5v/v%CO、3~8v/v%O的培养箱中静置培养12天；培养期间，每隔3天补加一次新鲜的第三培养基，培养结束后收集第三培养液中的上清液；22外泌体制剂提取：首先，对收集到的第三培养液中的上清液进行离心处理后，收集离心上清液；其次，将离心上清液用第一中空纤维管循环过滤，去除小分子液体，获得回流浓缩液；接着，往回流浓缩液中加入含1v/v%人血白蛋白的生理盐水，继续循环过滤，得到洗涤浓缩液；最后，将洗涤浓缩液用第二中空纤维管过滤，收集滤液，获得T细胞与干细胞的复合细胞外泌体制剂。