本发明公开了生产草酸氧化酶的大肠杆菌表达系统、草酸氧化酶的生产方法及其应用。
所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒包含：草酸氧化酶基因、分子伴侣基因和促进锰离子泵入大肠杆菌细胞相关蛋白的基因。
本发明通过对不同的锰离子相关蛋白的基因及其拷贝数，控制分子伴侣表达的启动子种类，以及草酸氧化酶的生产过程所用的培养基种类进行筛选和测试，获得草酸氧化酶的优化表达组合，使得草酸氧化酶在大肠杆菌中的表达活力超过80U/mL。
细胞破碎液上清初步纯化的草酸氧化酶的比活力大于20U/mg，单体分子量大小在25kDa左右。
本发明技术方案具有生产和纯化工艺简单，表达量和比活力高，易于工业放大，成本低，有利于这类酶的工业化生产和应用等优势。

汪小锋 吴玉峰 汪卫 刘艳红 陈火晴

武汉康复得生物科技股份有限公司

430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二路388号武汉光谷国际生物医药加速器3.1期4幢3层（1）厂房

本发明公开了生产草酸氧化酶的大肠杆菌表达系统、草酸氧化酶的生产方法及其应用。
所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒包含：草酸氧化酶基因、分子伴侣基因和促进锰离子泵入大肠杆菌细胞相关蛋白的基因。
本发明通过对不同的锰离子相关蛋白的基因及其拷贝数，控制分子伴侣表达的启动子种类，以及草酸氧化酶的生产过程所用的培养基种类进行筛选和测试，获得草酸氧化酶的优化表达组合，使得草酸氧化酶在大肠杆菌中的表达活力超过80U/mL。
细胞破碎液上清初步纯化的草酸氧化酶的比活力大于20U/mg，单体分子量大小在25kDa左右。
本发明技术方案具有生产和纯化工艺简单，表达量和比活力高，易于工业放大，成本低，有利于这类酶的工业化生产和应用等优势。