一种PCR仪荧光串扰系数标定方法及装置与应用
摘要文本
本发明提供了一种PCR仪荧光串扰系数标定方法及装置与应用。本发明的PCR仪荧光串扰系数标定方法包括：提供染料标定板，其包括多个装载不同浓度目标荧光染料体系的反应管；运行PCR扩增程序，采集对应目标荧光染料的光学通道以及非目标荧光染料光学通道的荧光信号数据；消除背景值；获取目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数，从而对荧光定量PCR仪进行串扰系数标定。本发明只需将荧光染料标定板放置在待标定的荧光定量PCR仪，便可以自动准确地完成对该台仪器的多个光学通道的串扰系数标定。
申请人信息
- 申请人:鲲鹏基因(北京)科技有限责任公司
- 申请人地址:102200 北京市昌平区七北路42号院TBD云集中心1号楼
- 发明人: 鲲鹏基因(北京)科技有限责任公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种PCR仪荧光串扰系数标定方法及装置与应用 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311753677.8 |
| 申请日 | 2023/12/19 |
| 公告号 | CN117434044B |
| 公开日 | 2024/3/8 |
| IPC主分类号 | G01N21/64 |
| 权利人 | 鲲鹏基因(北京)科技有限责任公司 |
| 发明人 | 何伟; 吕倩茹; 田卫星; 苗秀林; 章家磊 |
| 地址 | 北京市昌平区七北路42号院TBD云集中心1号楼 |
专利主权项内容
1.一种PCR仪荧光串扰系数标定方法，该方法是用于标定目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数，其特征在于，所述方法包括：提供染料标定板，所述染料标定板包括至少一种目标荧光染料体系区，每种目标荧光染料体系区包括至少一组目标荧光染料体系组，每组目标荧光染料体系组包括多个装载不同浓度目标荧光染料体系的反应管，其中，多个所述反应管中的一个所述反应管被配置为背景管，所述背景管装载浓度为零的目标荧光染料体系；装载浓度不为零的目标荧光染料体系的反应管为标定管；对染料标定板的反应管运行PCR扩增程序，分别采集标定管及背景管的对应目标荧光染料的光学通道的荧光信号数据以及非目标荧光染料光学通道的荧光信号数据；将采集的标定管的荧光信号数据消除背景值；以消除背景值后的非目标荧光染料光学通道的荧光信号数据与对应目标荧光染料的光学通道的荧光信号数据的比值，作为目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数，从而对荧光定量PCR仪进行串扰系数标定；其中，所述每组目标荧光染料体系组包括装载至少两种不同浓度目标荧光染料体系的标定管；所述以消除背景值后的非目标荧光染料光学通道的荧光信号数据与对应目标荧光染料的光学通道的荧光信号数据的比值，作为目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数，从而对荧光定量PCR仪进行串扰系数标定的过程包括：对于每个浓度目标荧光染料体系的标定管分别获得消除背景值后的非目标荧光染料光学通道的荧光信号数据与对应目标荧光染料的光学通道的荧光信号数据的比值数据，以多个比值数据的均值作为目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数K；其中，所述方法还包括确定荧光串扰关系式的过程，该过程包括：以同一浓度目标荧光染料体系的标定管的消除背景值后的对应目标荧光染料的光学通道的荧光信号数据为横坐标，以非目标荧光染料光学通道的荧光信号数据为纵坐标，利用多个浓度目标荧光染料体系的数据，在坐标系中进行最小二乘法拟合生成拟合曲线，获得拟合曲线的关系式：Y=K´×X+b，并令K´取值等于所述的目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数K，从而确定荧光串扰关系式为Y=K×X+b。。 （更多数据，详见马克数据网）