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一种基于劈裂式Cas9系统的RNA免反转录的检测方法
摘要文本
本发明公开了一种基于劈裂式Cas9系统的RNA免反转录的检测方法,涉及RNA检测技术领域。其包括如下步骤:将待测RNA序列、sgRNA‑P1和sgRNA‑P2进行混合反应,再将Cas蛋白和带有荧光标记物的双链DNA序列与混合反应后的产物混合,反应后检测反应产物中的荧光标记物的荧光强度,以此作为检测结果判定。本发明基于CRISPR系统的检测原理提供的免反转录的RNA检测方法兼具高特异性、结果判读简单、操作简便、检测准确、通用性良好、检测成本低等技术优势。可以满足环境及仪器配置有限的地区的检测需求。
申请人信息
- 申请人:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
- 申请人地址:100081 北京市海淀区中关村南大街12号
- 发明人: 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种基于劈裂式Cas9系统的RNA免反转录的检测方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311787095.1 |
| 申请日 | 2023/12/25 |
| 公告号 | CN117512076A |
| 公开日 | 2024/2/6 |
| IPC主分类号 | C12Q1/6844 |
| 权利人 | 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 |
| 发明人 | 李凯; 李亮; 李付凯; 王敏; 周剑; 杨梦瑞 |
| 地址 | 北京市海淀区中关村南大街12号 |
专利主权项内容
1.一种RNA免反转录的检测方法,其特征在于,其包括如下步骤:将待测RNA序列、sgRNA-P1和sgRNA-P2进行混合反应,再将Cas蛋白和带有荧光标记物的双链DNA序列与所述混合反应后的产物混合,反应后检测反应产物中的荧光标记物的荧光强度;所述sgRNA-P1的结构包括:5’-第二序列-第一序列-3’;所述第一序列与所述待测RNA序列的5’端的序列反向互补配对;所述第二序列为tracrRNA序列;所述sgRNA-P2的结构包括:5’-第五序列-第四序列-第三序列-3’;其中所述第五序列与所述待测RNA序列的5’端的序列反向互补配对;所述第三序列与所述双链DNA序列的其中一条链反向互补配对;所述第四序列与sgRNA-P1的部分所述第二序列反向互补配对,且所述第四序列的长度≥6bp;所述双链DNA由能够自发互补成双链结构的单链DNA形成。