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一种基于劈裂式Cas9系统的RNA免反转录的检测方法

申请号: CN202311787095.1
申请人: 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
申请日期: 2023/12/25

摘要文本

本发明公开了一种基于劈裂式Cas9系统的RNA免反转录的检测方法,涉及RNA检测技术领域。其包括如下步骤:将待测RNA序列、sgRNA‑P1和sgRNA‑P2进行混合反应,再将Cas蛋白和带有荧光标记物的双链DNA序列与混合反应后的产物混合,反应后检测反应产物中的荧光标记物的荧光强度,以此作为检测结果判定。本发明基于CRISPR系统的检测原理提供的免反转录的RNA检测方法兼具高特异性、结果判读简单、操作简便、检测准确、通用性良好、检测成本低等技术优势。可以满足环境及仪器配置有限的地区的检测需求。

专利详细信息

项目 内容
专利名称 一种基于劈裂式Cas9系统的RNA免反转录的检测方法
专利类型 发明申请
申请号 CN202311787095.1
申请日 2023/12/25
公告号 CN117512076A
公开日 2024/2/6
IPC主分类号 C12Q1/6844
权利人 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
发明人 李凯; 李亮; 李付凯; 王敏; 周剑; 杨梦瑞
地址 北京市海淀区中关村南大街12号

专利主权项内容

1.一种RNA免反转录的检测方法,其特征在于,其包括如下步骤:将待测RNA序列、sgRNA-P1和sgRNA-P2进行混合反应,再将Cas蛋白和带有荧光标记物的双链DNA序列与所述混合反应后的产物混合,反应后检测反应产物中的荧光标记物的荧光强度;所述sgRNA-P1的结构包括:5’-第二序列-第一序列-3’;所述第一序列与所述待测RNA序列的5’端的序列反向互补配对;所述第二序列为tracrRNA序列;所述sgRNA-P2的结构包括:5’-第五序列-第四序列-第三序列-3’;其中所述第五序列与所述待测RNA序列的5’端的序列反向互补配对;所述第三序列与所述双链DNA序列的其中一条链反向互补配对;所述第四序列与sgRNA-P1的部分所述第二序列反向互补配对,且所述第四序列的长度≥6bp;所述双链DNA由能够自发互补成双链结构的单链DNA形成。