基于2-ΔΔCt法检测SMN1基因拷贝数的试剂盒

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数据由马 克 数 据整理 。1.基于2法检测SMN1基因拷贝数的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括作为内对照的线性化的质粒片段，所述线性化的质粒片段包括质粒载体骨架、设计的内参基因内对照序列和设计的SMN1内对照序列；-ΔΔCt所述SMN1内对照序列和人基因组中SMN1待扩增片段的大小、位置和序列一致，仅在探针结合区与所述人基因组中SMN1待扩增片段的核苷酸序列不同，以特异性区分样本中扩增的人基因组中SMN1片段和扩增的SMN1内对照序列；所述内参基因内对照序列和内参基因待扩增片段的大小、位置和序列一致，仅在探针结合区与所述内参基因待扩增片段的核苷酸序列不同，以特异性区分扩增的内参基因片段和扩增的内参基因内对照序列；所述SMN1内对照序列和所述内参基因内对照序列通过一段含有限制性内切酶特异性识别位点的DNA序列连接，经人工合成双链基因片段后，插入到质粒载体中，从而获得内对照质粒，在内参基因内对照序列、SMN1内对照序列和所述质粒载体中均不含所述限制性内切酶特异性识别位点；所述内对照质粒经限制性内切酶酶切、纯化，得到所述线性化的质粒片段，所述线性化的质粒片段两端分别是所述SMN1内对照序列和所述内参基因内对照序列，所述SMN1内对照序列和所述内参基因内对照序列之间间隔2-10kb的质粒骨架序列；所述SMN1内对照序列是SEQ ID NO.1：5’- CCCCTACCTCCGCCTCCCAAAGTTGTGGGATTGTAGGCATGAGCCACTGCAAGAAAACCTTAACTGCAGCCTAATAATTGTTTTCTTTGGGATAACTTTTAAAGTACATTAAAAGACTATCAACTTAATTTCTGATCATATTTTGTTGAATAAAATAAGTAAAATGTCTTGTGAAACAAAATGCTTTTTAACATCCATATAAAGCTATCTATATATAGCTATCTATGTCTATATAGCTATTTTTTTTAACTTCCTTTATTTTCCTTCTAAAACAGACTTTGGGACAAAAAAGAAGGAAGGTGCTCACATTCCTTAAATTAAGGAGTAAGTCTGCCAGCATTATGAAAGTGAATCTTACTTTTGTAAAACTTTATGGTTTGTGGAAAACAAATGTTTTTGAACATTTAAAAAGTTCAGATGTTAAAAAGTTGAAAGGTTAATGTAAAAC-3’；和/或，所述内参基因内对照序列是SEQ ID NO.2：5’-TCTTGATTCAACTGTCACACACCTGTCCTTAGTAGCATCTTTATGACCATTATTTTTCATTAGTAAAGAAATGTGATCATCCACCCATGCCAGAACCTTTGGTCAGACATGAGAACAAAAGCTAATCAGGCAGGCACTGTTAGGAAGAGGCTGTTAGGAACAATCATTTGATGAGCTTTAGGCAATTTGCATCAAAATGGTCTTAGTCTGAGTAATGGACCCTAGAACGACTATTTTATCCATCTAAAAATTTAAAATAAGATGCTATGAAAGAAATATTCACAACCTTCAATAGCACATTATTTTTAATTTTTCTTTTTCAAGAATTCCTATAGCAGTTTTAAAGTGAACTTGATTAATGTACCAAGATGAAAATCAGAACTTTTTCCTTAAAAAATAATTATGCTGATAATATCCTTTTTTTCT-3’。