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一种高通量筛选Cbl-b抑制剂的方法及其应用
摘要文本
本发明涉及生物医药技术领域,尤其涉及一种高通量筛选Cbl‑b抑制剂的方法及其应用,包括以下步骤:S1、将泛素偶联酶包被在酶标板中;S2、向酶标板中加入不同浓度的Cbl‑b抑制剂后,再加入生物素标记的Cbl‑b;S3、向酶标板中加入SRC‑Zap70融合蛋白和三磷酸腺苷;S4、向酶标板中加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素;S5、向酶标板中加入化学发光底物,通过酶标仪读取化学发光信号值,并通过化学发光信号值拟合得到Cbl‑b抑制剂的IC50值。本发明的方法可实现Cbl‑b抑制剂的高通量筛选,反应灵敏度高,使用蛋白浓度低且信噪比高,大大降低化合物的检测限,能够检测到更加有潜力的Cbl‑b抑制剂。
申请人信息
- 申请人:北京爱思益普生物科技股份有限公司
- 申请人地址:100176 北京市大兴区经济技术开发区科创十三街18号院16号楼1层101
- 发明人: 北京爱思益普生物科技股份有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种高通量筛选Cbl-b抑制剂的方法及其应用 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311814081.4 |
| 申请日 | 2023/12/27 |
| 公告号 | CN117471106B |
| 公开日 | 2024/3/12 |
| IPC主分类号 | G01N33/68 |
| 权利人 | 北京爱思益普生物科技股份有限公司 |
| 发明人 | 李涛; 夏强; 张璐; 邴铁军; 李英骥 |
| 地址 | 北京市大兴区经济技术开发区科创十三街18号院16号楼1层101 |
专利主权项内容
1.一种高通量筛选Cbl-b抑制剂的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、将泛素偶联酶包被在酶标板中;所述的泛素偶联酶为UbcH5b重组人泛素偶联酶,其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;S2、向酶标板中加入不同浓度的Cbl-b抑制剂后,再加入生物素标记的Cbl-b;S3、向酶标板中加入SRC-Zap70融合蛋白和三磷酸腺苷;所述的SRC-Zap70融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示;S4、向酶标板中加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素;S5、向酶标板中加入化学发光底物,通过酶标仪读取化学发光信号值,并通过化学发光信号值拟合,得到Cbl-b抑制剂的IC值。50