高手性纯度西格列汀及使用固定化转氨酶制备的方法
摘要文本
本发明涉及高手性纯度西格列汀及使用固定化转氨酶制备的方法。其中制备磷酸西格列汀一水合物的方法包括如下步骤：将双酮化合物在溶剂中在磷酸吡多醛和异丙胺、固定化转氨酶的存在下反应，反应滤渣作为固定化转氨酶待下一批次使用；向滤液有机相中滴加磷酸，滤取沉淀，干燥，得到磷酸西格列汀一水合物。所述固定化转氨酶包含R‑转氨酶液、磷酸二氢钾、磷酸吡哆醛和酶固化颗粒物。本发明固定化转氨酶可以1~50使用后回收套用于下一批次。本发明还涉及用于制备磷酸西格列汀一水合物所用的固定化转氨酶，还涉及制备该固定化转氨酶的方法。本发明的固定化酶的重复利用率高、固定化酶的生产成本极低，转化产物的光学纯度和归一化纯度高。
申请人信息
- 申请人:北京元延医药科技股份有限公司; 长治市元延医药科技有限公司
- 申请人地址:101102 北京市通州区马驹桥金桥基地联东U谷西二区109A元延
- 发明人: 北京元延医药科技股份有限公司; 长治市元延医药科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 高手性纯度西格列汀及使用固定化转氨酶制备的方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311820581.9 |
| 申请日 | 2023/12/27 |
| 公告号 | CN117467733B |
| 公开日 | 2024/3/12 |
| IPC主分类号 | C12P41/00 |
| 权利人 | 北京元延医药科技股份有限公司; 长治市元延医药科技有限公司 |
| 发明人 | 陈斌; 钟智奎; 闫军军; 屈永民; 马良秀 |
| 地址 | 北京市通州区马驹桥金桥基地联东U谷西二区109A元延; 山西省长治市潞城市潞宝生态工业园区 |
专利主权项内容
1.制备磷酸西格列汀一水合物的方法，其包括如下步骤：(1)将0.1mol双酮化合物加至反应瓶中，加入甲基叔丁基醚0.5L搅拌使溶解，接着加入磷酸吡多醛8~12mmol、异丙胺盐酸盐0.4~0.6mol、首次使用或者本方法多次使用后回收套用的固定化转氨酶40~60g，在55~75°C下搅拌使物料回流反应12~18小时，趁热过滤；所述双酮化合物为下式化合物：
；(2)滤渣离心至干，作为回收的固定化转氨酶待下一批次使用；滤液冷却至室温，用水洗涤，得到包含氨酮化合物的有机相；所述氨酮化合物为下式化合物：
；(3)在搅拌下向有机相中滴加0.12~0.15mol磷酸，在5~10°C温度下继续搅拌4小时，过滤，沉淀依次用乙醇和异丙醇洗涤，干燥，得到磷酸西格列汀一水合物；其中，所述多次使用后回收套用的固定化转氨酶是指使用1~20次后回收套用的固定化转氨酶；所述固定化转氨酶包含如下比例的组分：包含固态酶粉100g的R-转氨酶液、磷酸二氢钾0.08~0.12mol、磷酸氢二钾0.1~0.14mol、氯化钙0.16~0.24mol、磷酸吡哆醛12~18g、四丁基氢氧化铵1.6~2.4g、海泡石颗粒400~600g、聚乙烯醇4~6g；所述固定化转氨酶是按照包括如下步骤的方法制备得到的：(i)在5~10°C温度环境下，向R-转氨酶液中加入磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钙、磷酸吡哆醛、四丁基氢氧化铵，搅拌2小时使溶解；(ii)接着将该混合液加至海泡石颗粒中，将盛装此固液混合物料的容器密封，通过翻转容器使物料混合1小时后静置24小时；(iii)翻转容器使物料混合30min后再向此固液混合物料中加入5%聚乙烯醇溶液，继续翻转容器使物料混合1小时；(iv)通过离心沥干水分至含水量小于5%，得固定化转氨酶。