← 返回列表
一种高效生产3-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌及其构建方法与应用
摘要文本
本发明公开了一种高效生产3‑岩藻糖基乳糖的大肠杆菌及其构建方法与应用，属于生物技术领域。通过在大肠杆菌的motA位点、fliR位点以及aptI位点整合α1, 3‑岩藻糖基转移酶，敲除ptsG、lacZ以及编码转录阻遏物的基因lacI，用Ptac替换lacY的天然启动子，在flgG位点增加一个拷贝的lacY；敲除wcaJ、pfkA、nudD、lon，强化表达rcsA；在外源α1, 3‑岩藻糖基转移酶其N端添加促溶标签SUMO并整合进基因组，最后通过在途径酶manB，manC上添加互作短肽RIAD，再转入带有互作短肽RIDD无序蛋白FUSN或RGG表达质粒获得了可高效生产3‑岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌，其胞外3‑FL的积累量最高达到13g/L。
申请人信息
- 申请人:宜兴食品与生物技术研究院有限公司; 江南大学
- 申请人地址:214000 江苏省无锡市宜兴市屺亭街道文庄路19号
- 发明人: 宜兴食品与生物技术研究院有限公司; 江南大学
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种高效生产3-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌及其构建方法与应用 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311420639.0 |
| 申请日 | 2023/10/30 |
| 公告号 | CN117467589A |
| 公开日 | 2024/1/30 |
| IPC主分类号 | C12N1/21 |
| 权利人 | 宜兴食品与生物技术研究院有限公司; 江南大学 |
| 发明人 | 刘龙; 陈坚; 吕雪芹; 堵国成; 黄子洋; 黄慧源 |
| 地址 | 江苏省无锡市宜兴市屺亭街道文庄路19号; 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号 |
专利主权项内容
1.一种生产3-岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌包括以下改造：敲除了葡萄糖特异性PTS酶IIBC组分基因ptsG、β-半乳糖苷水解酶基因lacZ、转录阻遏物基因lacI、6-磷酸果糖激酶1基因pfkA、十一烯磷酸葡萄糖-1-磷酸转移酶基因wcaJ、蛋白Lon基因lon、GDP-甘露糖甘露糖醇水解酶基因nudD，过表达了α1, 3-岩藻糖基转移酶基因futM和乳糖渗透酶基因lacY，且至少有一个拷贝的α1, 3-岩藻糖基转移酶基因futM上融合有SUMO标签，强化表达DNA结合转录激活蛋白基因rcsA，并表达了分别融合第一互作短肽的磷酸甘露糖变位酶基因manB和α-甘露糖-1-磷酸鸟苷转移酶基因manC，以及融合第二互作短肽的无序蛋白FUSN或RGG；22所述第一互作短肽和第二互作短肽可特异性结合。。关注公众号马 克 数 据 网