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一种肺炎球菌荚膜多糖的纯化方法
摘要文本
本发明属于生物医药领域，涉及一种细菌荚膜多糖的纯化方法，具体来说，特别涉及肺炎球菌荚膜多糖的纯化方法。本发明公开了一种纯化肺炎球菌荚膜多糖的工艺。步骤包括：肺炎球菌经无动物源成分的培养基发酵培养、溶解灭活、澄清、超滤浓缩等步骤得到肺炎球菌多糖粗提溶液，通过组合酸化和层析工艺，去除不同血清型的肺炎球菌荚膜多糖纯化过程中的杂质，得到符合要求的肺炎球菌荚膜多糖。本发明在不使用有毒有害物质苯酚、易燃易爆物质乙醇、导致工艺繁琐的物质CTAB的情况下和外源酶(蛋白酶、核酸酶)等物料的添加的条件下，有效去除杂质并获得符合药典标准要求的细菌荚膜多糖产品。
申请人信息
- 申请人:江苏金迪克生物技术股份有限公司
- 申请人地址:225316 江苏省泰州市医药高新区郁金路12号
- 发明人: 江苏金迪克生物技术股份有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种肺炎球菌荚膜多糖的纯化方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311331841.6 |
| 申请日 | 2023/10/16 |
| 公告号 | CN117512031A |
| 公开日 | 2024/2/6 |
| IPC主分类号 | C12P19/04 |
| 权利人 | 江苏金迪克生物技术股份有限公司 |
| 发明人 | 余军; 唐阳; 徐琳; 孟奇繁; 张丽丽 |
| 地址 | 江苏省泰州市医药高新区郁金路12号 |
专利主权项内容
1.一种肺炎球菌荚膜多糖的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：1)在装有不含动物源性成分的培养基的发酵罐中培养肺炎球菌；2)将发酵培养获得的肺炎球菌发酵液加入终浓度0.05-0.5％的脱氧胆酸钠于4-30℃灭活0.25-24h，得到细菌溶解液；3)使用连续流碟片式离心机以不低于10000G相对离心力离心步骤2)裂解后的细菌发酵液，再微滤去除沉淀物后得到发酵澄清液；4)对步骤3)获得的发酵澄清液进行超滤浓缩并换液，获得去除大部分可溶性蛋白质、核酸和大颗粒杂质的荚膜多糖溶液；5)在步骤4)获得的荚膜多糖溶液加酸调节pH值，静置0.5-4h后，在20℃下以不低于10000G相对离心力离心1h，弃去存在在于沉淀中的蛋白质和核酸等杂质，收集含有荚膜多糖成分的上清液；6)配制平衡缓冲液与梯度洗脱液，使用平衡缓冲液平衡层析柱至基线稳定；将步骤5)中获得的上清液进行色谱层析，检测206nm紫外吸收峰，收集流穿峰，收获后使用梯度洗脱液洗脱，收获洗脱峰，合并后获得纯化的荚膜多糖溶液；7)将步骤6)获得的荚膜多糖溶液进行超滤浓缩和洗滤，并进行无菌过滤、保存。