一种用于快速检测新型冠状病毒核酸的试剂盒和使用方法
摘要文本
本发明涉及一种用于快速检测新型冠状病毒核酸的试剂盒和使用方法，属于核酸检测技术领域，具体是一种基于硅基芯片的多重荧光定量PCR法用于新型冠状病毒检测，本发明根据人基因组内标片段、新冠病毒ORF1ab基因保守区域和N基因保守区域，分别设计特异性扩增引物和Taqman探针，检测扩增时长可在12分钟以内，可实现快速并准确的检测含主要变异株(Alpha、Beta、Gamma、Delta、Lambda、Eta、Iota、Mu、Omicron)在内的新型冠状病毒。通过新冠病毒ORF1ab基因和N基因的阴阳性来判断是否检测到新型冠状病毒，同时，本发明设置了内标，内标为人核糖核酸酶P(RNaseP)，可有效避免检测结果的假阴性，对检测样本的采集、运输和提取过程进行监控。
申请人信息
- 申请人:江苏硕世生物科技股份有限公司
- 申请人地址:225300 江苏省泰州市药城大道837号
- 发明人: 江苏硕世生物科技股份有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种用于快速检测新型冠状病毒核酸的试剂盒和使用方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311658005.9 |
| 申请日 | 2023/12/6 |
| 公告号 | CN117344062B |
| 公开日 | 2024/3/22 |
| IPC主分类号 | C12Q1/70 |
| 权利人 | 江苏硕世生物科技股份有限公司 |
| 发明人 | 王珊; 张蓉; 郭玉婉; 张少铎; 高萍; 陈永红; 黄青红; 严浩荣; 刘中华; 王国强 |
| 地址 | 江苏省泰州市药城大道837号 |
专利主权项内容
1.一种用于快速检测新型冠状病毒核酸的非诊断目的的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、待测样本核酸的提取对样本进行核酸提取，得到样本核酸；S2、配制试剂反应体系反应体系包括如下体积份数的各组分新型冠状病毒反应液7.5；酶混合液5；样本核酸12.5；S3、设置荧光PCR扩增程序S3-1、逆转录反应：温度50℃，时间2min；S3-2、预变性：温度95℃，时间10s；S3-3、变性：温度95℃，时间1s；S3-4、退火、延伸及检测荧光：温度55-60℃ ，时间5s或10s；所述检测荧光是在退火延伸时检测，检测通道分别为FAM、VIC、ROX；S3-3、S3-4共进行40-45个循环；步骤S2中，所述新型冠状病毒反应液包括：PCR缓冲液、MgCl、dNTPs、ORF1ab引物探针、N引物探针、RNaseP引物探针、去RNA酶水；所述MgCl的浓度为3.3mM；dNTPs的浓度为0.2mM；22所述ORF1ab引物探针包括：ORF1ab特异性引物，浓度为0.1-1μM，序列为SEQ ID No.1；ORF1ab引物，浓度为0.1-1μM，序列为SEQ ID No.2；ORF1ab 探针，浓度为0.1-1μM，序列为SEQ ID No.7；所述N引物探针包括：N特异性引物，浓度为0.1-1μM，序列为SEQ ID No.3；N引物，浓度为0.1-1μM，序列为SEQ ID No.4；N探针，浓度为0.1-1μM，序列为SEQ ID No.8；所述RNaseP引物探针包括：RNaseP特异性引物，浓度为0.1-1μM，序列为SEQ ID No.5；RNaseP引物，浓度为0.1-1μM，序列为SEQ ID No.6；RNaseP探针，浓度为0.1-1μM，序列为SEQ ID No.9；步骤S2中，所述酶混合液包括RNA酶抑制剂、DNA聚合酶、逆转录酶、UDG酶；各组分含量均为1-2U/Test；步骤S3中，在不同核酸扩增分析仪上，荧光PCR扩增程序具体包括程序1或程序2：1)微纳芯片核酸扩增分析仪程序1：50℃ 2min；95℃ 10s；95℃ 1s，60℃ 5s，共进行45个循环；2)ABI Q5荧光定量PCR仪程序2：50℃ 2min；95℃ 10s；95℃ 1s，60℃ 10s，共进行42个循环。