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一种纯化体外转录mRNA的方法及应用
摘要文本
本发明提供一种纯化体外转录(IVT)mRNA的方法及应用。所述方法具体采用氯化锂沉淀法、Oligo dT亲和层析、DEAE离子交换层析的依次联合使用，并对亲和层析的NaCl梯度洗脱进行筛选优化，以及对DEAE离子交换层析和疏水层析进行了比较，选择dsRNA去除效果更好的DEAE离子交换层析。本发明的方法逐步去除mRNA IVT原液中的游离核苷酸、小分子核苷酸片段、蛋白质和dsRNA等杂质，来实现高纯度mRNA样品的制备。本发明方法获得的mRNA纯度可达97%以上，同时还可达到特异性去除dsRNA的效果。通过本发明的方法省时、节约原料，可高效制备高纯度科研级、药用级mRNA制品。
申请人信息
- 申请人:江苏耀海生物制药有限公司
- 申请人地址:225300 江苏省泰州市健康大道801号27幢(药城)
- 发明人: 江苏耀海生物制药有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种纯化体外转录mRNA的方法及应用 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311569051.1 |
| 申请日 | 2023/11/23 |
| 公告号 | CN117603958A |
| 公开日 | 2024/2/27 |
| IPC主分类号 | C12N15/10 |
| 权利人 | 江苏耀海生物制药有限公司 |
| 发明人 | 左涛; 刘凯; 王满朝 |
| 地址 | 江苏省泰州市健康大道801号27幢(药城) |
专利主权项内容
1.一种纯化体外转录(IVT)mRNA的方法，其特征在于，所述方法依次包含如下步骤：(1)氯化锂沉淀法富集体外转录的mRNA产物；(2)Oligo dT亲和层析二次纯化mRNA：将所述步骤(1)获得的粗纯mRNA样品载样至Oligo dT柱，采用0.5 M NaCl、0.1 M NaCl逐级梯度洗脱，获得包含mRNA的样品；(3)DEAE离子交换层析三次纯化mRNA：将所述步骤(2)获得的包含mRNA的样品载样至DEAE阴离子柱，通过淋洗液洗去未结合的杂质，然后经过洗脱液进行pH梯度洗脱，所述pH梯度为pH 7.2-pH 11，进一步去除mRNA中包含dsRNA的杂质核酸分子，收获体外转录mRNA产品。