一种构建SMA小鼠模型的方法
摘要文本
本发明属于动物基因工程和基因遗传修饰领域，公开了一种构建SMA小鼠模型的方法，具体地说，涉及基于同源重组技术的Smn1基因修饰人源化动物模型的构建方法及其在生物医药的应用。本文公开了包含编码SMN蛋白质的核酸序列的非人动物，所述SMN蛋白质包含人基因序列。本文还公开了包含整体或部分为人的SMN2基因的转基因非人动物。本发明还公开了表达人或人源化SMN蛋白质的非人动物。另外，本发明公开了用于制备和使用包含人或人源化SMN2核酸序列的非人动物的方法。本发明获得的小鼠不再表达小鼠Smn1内源基因，在人源SMN2的调控元件下驱动人SMN2全长序列的转录调控，使得治疗评价中的各类序列可完全靶向人的SMN2序列，可促进脊髓性肌萎缩症的相关科研产业。
申请人信息
- 申请人:赛业(苏州)生物科技有限公司
- 申请人地址:215400 江苏省苏州市太仓市沙溪镇振溪路69号
- 发明人: 赛业(苏州)生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种构建SMA小鼠模型的方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311195012.X |
| 申请日 | 2023/9/16 |
| 公告号 | CN117363660A |
| 公开日 | 2024/1/9 |
| IPC主分类号 | C12N15/90 |
| 权利人 | 赛业(苏州)生物科技有限公司 |
| 发明人 | 牟星; 徐婧语 |
| 地址 | 江苏省苏州市太仓市沙溪镇振溪路69号 |
专利主权项内容
1.一种构建SMA小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：使用小鼠ES胚胎干细胞制备基因工程小鼠，以用47.9kb人SMN2基因组序列替换小鼠全长Smn1基因座；(1) 构建打靶载体I，打靶载体包含5arm同源臂序列、Puro抗性筛选元件及3arm同源臂，其中Puro两侧分别带有一个loxP和lox511元件，其中同源臂序列从C57BL/6小鼠的基因组中进行扩增获取；(2) 构建打靶Bac载体II，人SMN2基因上游15kb处插入与打靶载体I同向的loxP重组酶位点，在人SMN2基因下游5kb处插入与打靶载体I同向的lox511重组酶位点；且人SMN2基因与lox511之间包含一个Neo抗性筛选元件, 其中BAC是RP11-1012N14；(3) 将构建好的打靶载体I电转到C57BL/6品系的ES细胞中，细胞经过Puromycin药物筛选，挑取药物抗性的ES克隆，相关ES克隆进行培养、扩增后进行PCR分型鉴定及Southern鉴定，获得正确打靶的阳性ES细胞I；(4) 将构建好的Bac载体II电转到ES细胞I中，细胞经过G418药物筛选，挑取药物抗性的ES克隆，相关ES克隆进行培养、扩增后进行PCR分型鉴定及Southern鉴定，获得正确打靶的阳性ES细胞II；(5) 将阳性ES细胞II注射入囊胚中，再将囊胚移植到代孕鼠内，通过孕期，小鼠出生；(6) 剪取幼鼠鼠爪，提取DNA，进行PCR分型鉴定确认小鼠基因型；(7) 将雄性Founder小鼠与野生型异性小鼠交配获得F1代杂合子小鼠，小鼠出生后PCR鉴定，若有阳性小鼠出生，则表示转基因已经整合到生殖细胞；(8) 将雄性F1小鼠和雌性F1小鼠相互配种，F2小鼠出生后PCR鉴定，确认纯合子小鼠的出生，获得SMA小鼠模型。 微信公众号马克 数据网