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一种异源二聚体膜蛋白离子通道细胞模型的制备方法
摘要文本
本发明属于生物技术领域，具体公开了一种异源二聚体膜蛋白离子通道细胞模型的制备方法，本发明透过Cd8α/β分子的异源二聚体特性，设计了一种间接但有效分析异源二聚体重组膜蛋白表达的方法，具体的，透过Cd8α/β分子的分布表型，得以区分不同Nav1.5表达、组成的细胞，结合膜片钳技术操控细胞膜电位并监控细胞内电流，验证不同Cd8α/β分子表型的细胞的Nav1.5通道功能，进而获得具有正常生理功能的心肌钠离子通道Nav1.5稳定表达细胞系；进一步的，本发明还提供一种经济且可靠的Nav1.5‑HEK‑293T细胞平台，供临床前药物安全性筛选，也不限于钠离子通道Nav1.5，此方法亦可运用于不同的异源二聚体重组膜蛋白表达与细胞系建立。
申请人信息
- 申请人:苏州启辰生物科技有限公司
- 申请人地址:215400 江苏省苏州市太仓市沙溪镇昭溪路1号10号楼205室
- 发明人: 苏州启辰生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种异源二聚体膜蛋白离子通道细胞模型的制备方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311309170.3 |
| 申请日 | 2023/10/10 |
| 公告号 | CN117363580A |
| 公开日 | 2024/1/9 |
| IPC主分类号 | C12N5/10 |
| 权利人 | 苏州启辰生物科技有限公司 |
| 发明人 | 李振诚; 赖威仲 |
| 地址 | 江苏省苏州市太仓市沙溪镇昭溪路1号10号楼205室 |
专利主权项内容
1.一种异源二聚体膜蛋白离子通道细胞模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)载体构建一：将SCN5A编码序列与Cd8b1编码序列共同连接至载体1：所述SCN5A编码序列的3‘端依次连接3xHA标记、T2A肽、Cd8b1、IRES、杀稻瘟菌素抗药基因bsd与WPRE；2)载体构建二：将SCN1B编码序列与Cd8a编码序列共同连接至载体2：所述SCN1B编码序列的3’端依次连接V5标记、T2A肽、Cd8a、IRES、嘌呤霉素抗药基因PAC与WPRE；3)细胞膜表达：载体1与载体2共转表达细胞，在细胞膜表达蛋白Cd8α/β与Nav1.5钠离子通道蛋白；4)Nav1.5表达细胞单克隆筛选：利用限制稀释建立单克隆Nav1.5细胞系，通过Cd8α与β抗体染色结合流式细胞仪分析，筛选SCN5A与SCN1B表达量、比例不同的单细胞克隆。 马 克 数 据 网