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一种大片段DNA的酵母高效组装方法及其应用
摘要文本
本发明提供了一种大片段DNA的酵母高效组装方法及其应用，涉及分子生物学与合成生物学技术领域。本发明通过在酵母载体上插入α‑半乳糖苷酶的MEL1基因表达盒，使转入表达盒质粒的酿酒酵母在X‑α‑Gal的平板上可以呈现出肉眼可见的蓝色菌落，便于区分重组过程中的正确阳性克隆和假阳性克隆，有效降低筛选工作量，缩短周期，且筛选成功率高达92.7％。本发明肉眼可见的蓝色、白色菌落可作为自动化设备的挑斑条件，可提升自动化筛选的效率和通量，极大增加了酵母TAR技术应用于自动化流程的可行性。
申请人信息
- 申请人:苏州泓迅生物科技股份有限公司
- 申请人地址:215123 江苏省苏州市工业园区星湖街218号生物纳米园C20楼
- 发明人: 苏州泓迅生物科技股份有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种大片段DNA的酵母高效组装方法及其应用 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311589727.3 |
| 申请日 | 2023/11/27 |
| 公告号 | CN117587057A |
| 公开日 | 2024/2/23 |
| IPC主分类号 | C12N15/81 |
| 权利人 | 苏州泓迅生物科技股份有限公司 |
| 发明人 | 徐杰; 徐曾妮; 李美美; 申姝茵; 柳伟强; 杨平 |
| 地址 | 江苏省苏州市工业园区星湖街218号生物纳米园C20楼 |
专利主权项内容
1.一种大片段DNA的酵母高效组装方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、在酵母载体上插入α-半乳糖苷酶的MEL1基因表达盒，获得酵母TAR同源重组载体；S2、将所述重组载体线性化，并与其它拟组装的DNA片段转化酿酒酵母感受态细胞；S3、涂布至含有X-α-Gal的选择性平板上，根据蓝白斑进行筛选，PCR及测序验证，获得大片段DNA。