基于流式细胞仪同时检测12种细胞因子的试剂盒及方法
摘要文本
本发明提供了一种基于流式细胞仪同时检测12种细胞因子的试剂盒及方法，针对12种细胞因子，分别筛选和优化12种细胞因子的抗体1序列和抗体2序列，经真核细胞表达系统表达制备人源化的重组抗体；其中抗体1用于制备偶联微球的抗体溶液，抗体2用于制备荧光标记的抗体溶液；并针对其中最难检测的IL‑17A抗体序列进行多次突变筛选和重链轻链组合配对筛选，获得最优选的IL‑17A抗体1和IL‑17A抗体2序列。制备的试剂盒经流式细胞仪实现同时检测12种细胞因子，检测过程只需一次孵育一次洗涤，且能提高检测的准确性和灵敏度，控制批间差，对血清样品和血浆样品都实现精确检测。
申请人信息
- 申请人:江西赛基生物技术有限公司; 杭州赛基生物科技有限公司
- 申请人地址:330000 江西省南昌市南昌高新技术产业开发区创新三路799号E厂房二楼、D厂房三楼
- 发明人: 江西赛基生物技术有限公司; 杭州赛基生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 基于流式细胞仪同时检测12种细胞因子的试剂盒及方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311645688.4 |
| 申请日 | 2023/12/4 |
| 公告号 | CN117368493B |
| 公开日 | 2024/3/15 |
| IPC主分类号 | G01N33/68 |
| 权利人 | 江西赛基生物技术有限公司; 杭州赛基生物科技有限公司 |
| 发明人 | 陈善问; 徐陈槐; 周延庆; 沈承昊; 杨明 |
| 地址 | 江西省南昌市南昌高新技术产业开发区创新三路799号E厂房二楼、D厂房三楼; 浙江省杭州市余杭区仓前街道西溪堂商务中心5幢401室 |
专利主权项内容
1.一种基于流式细胞仪检测12种细胞因子的试剂盒，其特征在于，包括：偶联微球的抗体溶液，荧光标记的抗体溶液，微球缓冲液、样品稀释液和洗涤缓冲液；所述偶联微球的抗体溶液中的抗体为抗体1，荧光标记的抗体溶液中的抗体为抗体2；所述抗体1包括IL-1β抗体1、IL-2抗体1、IL-4抗体1、IL-5抗体1、IL-6抗体1、IL-8抗体1、IL-10抗体1、IL-12p70抗体1、IL-17A抗体1、IFN-γ抗体1、TNF-α抗体1和IFN-α抗体1；抗体2包括IL-1β抗体2、IL-2抗体2、IL-4抗体2、IL-5抗体2、IL-6抗体2、IL-8抗体2、IL-10抗体2、IL-12p70抗体2、IL-17A抗体2、IFN-γ抗体2、TNF-α抗体2和IFN-α抗体2；所述IL-17A抗体1的重链的CDR3区的氨基酸序列如Seq ID NO : 193所示，轻链的CDR3区的氨基酸序列如Seq ID NO : 223所示；IL-17A抗体2的重链的CDR3区的氨基酸序列如Seq ID NO : 263所示，轻链的CDR3区的氨基酸序列如SeqID NO : 279所示；所述IL-17A抗体1的重链的氨基酸序列如Seq ID NO : 116所示，轻链的氨基酸序列如Seq ID NO : 117所示，IL-17A抗体2的重链的氨基酸序列如Seq ID NO : 118所示，轻链的氨基酸序列如Seq ID NO : 119所示；用于编码所述抗体1和抗体2的重链与轻链的核苷酸序列如下：编码IL-1β抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 1所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 2所示；编码IL-1β抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 3所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 4所示；编码IL-2抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 5所示，轻链的核苷酸序列如Seq IDNO : 6所示；编码IL-2抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 7所示，轻链的核苷酸序列如Seq IDNO : 8所示；编码IL-4抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 9所示，轻链的核苷酸序列如Seq IDNO : 10所示；编码IL-4抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 11所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 12所示；编码IL-5抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 13所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 14所示；编码IL-5抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 15所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 16所示；编码IL-6抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 17所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 18所示；编码IL-6抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 19所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 20所示；编码IL-8抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 21所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 22所示；编码IL-8抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 23所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 24所示；编码IL-10抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 25所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 26所示；编码IL-10抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 27所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 28所示；编码IL-12p70抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 29所示，轻链的核苷酸序列如Seq ID NO : 30所示；编码IL-12p70抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 31所示，轻链的核苷酸序列如Seq ID NO : 32所示；编码IL-17A抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 33所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 34所示；编码IL-17A抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 35所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 36所示；编码IFN-γ抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 37所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 38所示；编码IFN-γ抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 39所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 40所示；编码TNF-α抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 41所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 42所示；编码TNF-α抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 43所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 44所示；编码IFN-α抗体1的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 45所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 46所示；编码IFN-α抗体2的重链的核苷酸序列如Seq ID NO : 47所示，轻链的核苷酸序列如SeqID NO : 48所示。 关注公众号马克数据网