一种基于CRISPR/Cas12a-RPA快速检测红火蚁的序列组合及其应用
摘要文本
本发明提供一种基于CRISPR/Cas12a‑RPA快速检测红火蚁的序列组合及其应用，属于生物检测技术领域，一种基于CRISPR/Cas12a‑RPA快速检测红火蚁的序列组合包括检测红火蚁的RPA引物对和特异性crRNA序列，以及利用该序列组合制成的试剂盒和利用该试剂盒在检测田间红火蚁的检测方法。本发明的检测方法将RPA扩增方法与CRISPR/Cas12a的检测方法相结合来检测红火蚁，通过蓝光切胶仪和侧流层析试纸条实现了可视化检测；本发明的检测方法简单快速，具有良好的特异性和敏感性，只需要简单的恒温加热便可以进行检测，具有在现场和田间快速对红火蚁核酸进行检测的优势。
申请人信息
- 申请人:中国热带农业科学院三亚研究院
- 申请人地址:572000 海南省三亚市崖州区创意产业标准厂房二期三楼235区
- 发明人: 中国热带农业科学院三亚研究院
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种基于CRISPR/Cas12a-RPA快速检测红火蚁的序列组合及其应用 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311321955.2 |
| 申请日 | 2023/10/13 |
| 公告号 | CN117089631B |
| 公开日 | 2024/2/6 |
| IPC主分类号 | C12Q1/6888 |
| 权利人 | 中国热带农业科学院三亚研究院 |
| 发明人 | 赵辉; 张金鑫; 胡帅; 杜晓希; 纪长绵; 贾瑞宗; 张雨良; 郭安平 |
| 地址 | 海南省三亚市崖州区创意产业标准厂房二期三楼235区 |
专利主权项内容
1.一种基于CRISPR/Cas12a-RPA快速检测红火蚁的序列组合，包括根据基因设计的RPA引物对序列、crRNA序列，其特征在于，TFRPA引物对序列为：正向引物RPA-TF-F1的序列如SEQ ID NO：1所示；反向引物RPA-TF-R2的序列如SEQ ID NO：2所示；crRNA序列如SEQ ID NO：3所示；所述序列组合还包括ssDNA探针序列；所述ssDNA探针序列是用于荧光定量PCR仪器检测的红火蚁的ssDNA探针序列、用于可视化荧光检测的红火蚁的ssDNA探针序列或用于侧流层析试纸条检测的红火蚁的ssDNA探针序列；用于荧光定量PCR仪器检测的红火蚁的ssDNA探针序列为ssDNA-reporter-FAM或ssDNA-reporter-CY5；其中，ssDNA-reporter-FAM为：5’-6-FAM-TTATT-BHQ1-3’；ssDNA-reporter-CY5为：5’-CY5-TGTCTTATcccccATAAGACA-BHQ1-3’；用于可视化荧光检测的红火蚁的ssDNA探针序列为ssDNA-reporter-FAM-2，具体为：5’-6-FAM-TGTCTTATcccccATAAGACA-BHQ1-3’；用于侧流层析试纸条检测的红火蚁的ssDNA探针序列为FB-reporter，具体为：5’-6-FAM-TTTTTTTTT-Biotin-3’。