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一种获得橡胶树纯合基因编辑植株的方法
摘要文本
本发明提供了一种获得橡胶树纯合基因编辑植株的方法，涉及基因工程技术领域。将基因编辑载体进行酶切，得到酶切载体，与靶标序列连接，得到连接产物，转化到大肠杆菌中和农杆菌中，得到转化菌，侵染橡胶树体胚等步骤得到橡胶树纯合基因编辑植株。本发明以基因编辑载体作为转化供体，通过对阳性抗性体胚的高通量测序判断其是否为嵌合体，T0代抗性体胚均为嵌合体。本发明通过对获得的T0代阳性嵌合体胚进行切胚纯化后继续继代，从而获得了T1代抗性体胚，T1代抗性体胚有约50％的比例达到了纯合，挑选这些T1代纯合编辑体胚进行植株再生，本发明首次获得了橡胶树纯合基因编辑植株。
申请人信息
- 申请人:中国热带农业科学院橡胶研究所
- 申请人地址:570100 海南省海口市龙华区学院路4号
- 发明人: 中国热带农业科学院橡胶研究所
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种获得橡胶树纯合基因编辑植株的方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311421131.2 |
| 申请日 | 2023/10/31 |
| 公告号 | CN117487847A |
| 公开日 | 2024/2/2 |
| IPC主分类号 | C12N15/82 |
| 权利人 | 中国热带农业科学院橡胶研究所 |
| 发明人 | 杨先锋; 林秋飞; 吉努·乌达亚巴努; 黄天带; 顾晓川; 邓玉婷 |
| 地址 | 海南省海口市龙华区学院路4号 |
专利主权项内容
1.一种获得橡胶树纯合基因编辑植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将pCAMBIA1300-2×35SCas9-HbU6.2载体进行酶切，得到酶切载体；所述pCAMBIA1300-2×35SCas9-HbU6.2载体的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；2)将所述步骤1)得到的酶切载体与靶标序列连接，得到连接产物；3)将所述步骤2)得到的连接产物转化到大肠杆菌中，提取质粒，将所述质粒转入到农杆菌中，得到转化菌；4)将所述步骤3)得到的转化菌侵染橡胶树体胚，得到侵染体胚；5)将所述步骤4)得到的侵染体胚切胚，得到胚块，将所述胚块进行愈伤组织诱导培养和体胚形成培养，筛选阳性转化体胚得到T0代体胚；6)将所述步骤5)得到的T0代体胚切胚，得到胚块，将所述胚块进行愈伤组织诱导培养和体胚形成培养，得到T1代体胚，挑选纯合基因编辑体胚进行植株再生，得到橡胶树纯合基因编辑植株。