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一种斑马鱼胚胎单细胞悬液的制备方法及设备
摘要文本
本发明涉及斑马鱼胚胎单细胞制备技术领域，具体涉及一种斑马鱼胚胎单细胞悬液的制备方法及设备，其中，斑马鱼胚胎单细胞悬液的制备方法包括步骤为收集斑马鱼的受精卵发育10小时，选取bud时期的斑马鱼卵；待发育至long pec时期，剥去卵膜，收集去卵膜的胚胎；瞬时离心，去掉胚胎培养液；用1ml预冷的PBS清洗两次，再用1ml的PBS重悬去卵膜的胚胎；将1ml的PBS含有去卵膜的胚胎转移至预冷的匀浆器，在冰上匀浆；过滤单细胞悬液，浓缩单细胞悬液，单细胞悬液计数。通过使用基本器材进行集卵、清洗、均浆、过滤、计数即可得出单细胞数量，用于ChIP‑Seq生物组学技术，操作流程简单，成本低，且不引入杂质，细胞得率准确性高。
申请人信息
- 申请人:中国科学院水生生物研究所
- 申请人地址:430000 湖北省武汉市东湖南路7号
- 发明人: 中国科学院水生生物研究所
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种斑马鱼胚胎单细胞悬液的制备方法及设备 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311356032.0 |
| 申请日 | 2023/10/18 |
| 公告号 | CN117417882A |
| 公开日 | 2024/1/19 |
| IPC主分类号 | C12N5/073 |
| 权利人 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 发明人 | 欧阳刚; 罗大极; 刘飞; 赵媛莉 |
| 地址 | 湖北省武汉市东湖南路7号 |
专利主权项内容
1.一种斑马鱼胚胎单细胞悬液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)收集斑马鱼的受精卵，发育10小时，选取bud时期的斑马鱼卵300颗；(2)待发育至48小时，剥去卵膜，收集去卵膜的胚胎100枚；(3)瞬时离心，去掉胚胎培养液；(4)用1ml预冷的PBS清洗两次，再用1ml的PBS重悬去卵膜的胚胎；(5)将1ml的PBS含有去卵膜的胚胎转移至预冷的匀浆器，在冰上匀浆；(6)用50ml离心管收集细胞悬液，将1ml的细胞悬液转移至过滤器的筛网，过滤细胞悬液；(7)冲洗过滤器的筛网内细胞过滤；(8)将50ml离心管收集细胞悬液分别取1ml转移至两个1.5ml EP管，离心，去掉上清；(9)从50ml离心管中，分别取0.5ml细胞悬液，分别加至步骤(8)中两个1.5ml EP管中，重悬细胞；(10)然后两管细胞悬液合并成一管，混匀后，细胞计数。 来自：马 克 团 队