重组mIL13慢病毒悬浮无血清稳定细胞株的构建及蛋白纯化方法
摘要文本
本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种重组mIL13慢病毒悬浮无血清稳定细胞株的构建方法，该方法首先是将mIL13基因插入pLVX‑AcGFP1‑N1慢病毒转移载体质粒中构建得到mIL13重组慢病毒转移载体质粒，然后将该重组质粒在特定的条件下转染HEK293F细胞并在无血清培养基中进行悬浮培养获得mIL13重组慢病毒液，最后再将mIL13重组慢病毒液感染哺乳动物细胞，用OPM‑293CD05培养基悬浮培养并用嘌呤霉素筛选即得。该方法，不仅解决了贴壁细胞依赖FBS和难以放大生产的缺点，也避免了慢病毒商业化表达系统成本昂贵、操作复杂的缺点，同时能快速高效获得稳定细胞株，提高产能，降低重组蛋白的生产成本并且能获得较高的活性。
申请人信息
- 申请人:武汉爱博泰克生物科技有限公司
- 申请人地址:430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二路388号武汉光谷国际生物医药企业加速器1.1期7栋4层01室(自贸区武汉片区)
- 发明人: 武汉爱博泰克生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 重组mIL13慢病毒悬浮无血清稳定细胞株的构建及蛋白纯化方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311451424.5 |
| 申请日 | 2023/10/31 |
| 公告号 | CN117646034A |
| 公开日 | 2024/3/5 |
| IPC主分类号 | C12N15/867 |
| 权利人 | 武汉爱博泰克生物科技有限公司 |
| 发明人 | 周雪莉; 马雁; 宋从进; 余建敏; 王朝; 赵中梳; 张福城 |
| 地址 | 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二路388号武汉光谷国际生物医药企业加速器1.1期7栋4层01室(自贸区武汉片区) |
专利主权项内容
1.重组mIL13慢病毒悬浮无血清稳定细胞株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，将mIL13基因插入pLVX-AcGFP1-N1慢病毒转移载体质粒中构建得到mIL13重组慢病毒转移载体质粒；S2，将转染试剂PEI max用Opti-MEM培养基稀释后室温孵育4～5min，将每1mL细胞需要的总质粒量2.0～2.5μg按照mIL 13重组慢病毒转移载体质粒：病毒包装辅助质粒pCMV-VSV-G：pRSV-Rev：pSPAX2＝(1.5～2.0)：1：1：1的质量比同样用Opti-MEM培养基稀释；将上述稀释后的质粒与孵育后的转染试剂混匀，室温继续孵育10～20min得DNA-PEImax复合物，其中，PEImax的用量与总质粒的质量比为(2～3) : 1；将DNA-PEI max复合物加入到生长良好的活细胞密度为3.5～4.0×10cells/mL的HEK293F细胞中并用OPM-293CD05细胞培养基悬浮培养；6转染16～20h后添加1～10mM丁酸钠和体积比为3～5％的OPM-293ProFeed，转染48～55h后离心收获慢病毒，过滤除去细胞碎片，即得mIL13重组慢病毒液；S3，将mIL13重组慢病毒液感染哺乳动物细胞，用OPM-293CD05培养基悬浮培养并用嘌呤霉素筛选即得。