一种免疫细胞中淋巴细胞的流式细胞仪检测方法

专利主权项内容

1.一种人离体的免疫细胞中淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述方法包括：a)取免疫荧光抗体染色的淋巴细胞样品，加入预冷的PBS-EDTA溶液，混均细胞，备流式细胞仪检测待用；b)对流式细胞仪系统进行开机预热，调节液流速度为30～44μl/min的中速范围，向样品管中加入PBS-EDTA溶液，冲洗液流的喷嘴系统；c)将步骤a)所得混均细胞样品加入样品管然后进行检测，并设置条件为：门内3000～20000个细胞；采集样品；所述PBS-EDTA溶液为pH7.2～7.4的含有0.005-0.05M PBS和终浓度为2-3mM EDTA的混合溶液；所述淋巴细胞样品如下方法制备：1)取人离体抗凝血液样品进行离心，分离血浆和血液细胞沉淀，得血液细胞沉淀；2)将血液细胞沉淀用PBS溶液进行稀释，得血液细胞稀释液；3)将血液细胞稀释液缓慢加入到含等体积的淋巴细胞分离液的离心管中，然后离心，去掉血浆，取白膜层细胞；4)取步骤3)所得白膜层细胞加入到离心管中，加入PBS溶液混合均匀，离心并去除上清液，然后再加入PBS溶液，调整细胞浓度范围是1.5×10个/ml～5×10个/ml；665)取步骤4)所得调整浓度后的淋巴细胞加入流式管内；并加入用于标记淋巴细胞亚群的流式抗体，混匀，2～8℃静置并避光孵育；其中，所述抗体为抗CD3抗体、lin1[LineageCocktail 1]、抗CD123的抗体、抗CD11的抗体、CD3 FITC、CD8PerCP、CD4PerCP；6)加入PBS溶液、混匀，离心洗掉未结合抗体；7)样品的完成；①如果立即上机检测，则弃去上清，加入预冷至2～8℃的PBS-EDTA溶液，混匀细胞，用于流式检测；②如不能立即检测，直接用0.05-5％福尔马林悬起细胞，混匀，静置于2～8℃避光保存；检测前各管加入PBS溶液，离心弃掉上清液，用2～8℃的PBS-EDTA溶液、混匀细胞，用于流式检测；所述PBS溶液为pH7.2～7.4的0.005-0.05M PBS溶液。 来源：百度马 克 数据网