mRNA-LNP递送系统、制备工艺及其在人源间充质干细胞应用
申请人信息
- 申请人:江苏拓弘康恒医药有限公司
- 申请人地址:211000 江苏省南京市江宁区东山街道永胜路66号2幢
- 发明人: 江苏拓弘康恒医药有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | mRNA-LNP递送系统、制备工艺及其在人源间充质干细胞应用 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202210838884.2 |
| 申请日 | 2022/7/18 |
| 公告号 | CN115386599B |
| 公开日 | 2024/1/12 |
| IPC主分类号 | C12N15/88 |
| 权利人 | 江苏拓弘康恒医药有限公司 |
| 发明人 | 张晓欢; 廉云飞; 陆晓; 李天邦; 葛婷 |
| 地址 | 江苏省南京市江宁区东山街道永胜路66号2幢 |
摘要文本
本发明涉及医药生物技术领域，尤其涉及一种mRNA‑LNP递送系统、递送工艺及其在人源间充质干细胞应用，包括负载一种或多种mRNA的LNP非病毒载体，所述LNP非病毒载体包括可电离阳离子脂质、胆固醇、中性辅助磷脂或/且PEG脂质，所述可电离阳离子脂质为Dlin‑MC3‑DMA或DOTAP；所述中性辅助磷脂为DSPC或DOPE；所述PEG脂质为DSPE‑PEG2000。本发明创新点在于一方面自设计脂质组分比例形成mRNA‑LNP，另一方面这些复合表征的mRNA‑LNP能够实现难转染细胞MSC的有效转染，mRNA‑LNP对MSC安全性良好，孵育24h无明显细胞毒、转染过程操作简便，本发明为MSC转染提供了新的简便思路，对增强基因修饰型干细胞的胞内蛋白表达提供了更佳的选择。
专利主权项内容
1.一种mRNA-LNP递送系统，其特征在于，包括负载一种或多种mRNA的LNP非病毒载体，所述LNP非病毒载体包括可电离阳离子脂质、胆固醇、中性辅助磷脂和PEG脂质；所述可电离阳离子脂质为Dlin-MC3-DMA，所述中性辅助磷脂为DSPC或DOPE；所述PEG脂质为DSPE-PEG2000；所述可电离阳离子脂质、胆固醇、中性辅助磷脂以及PEG脂质之间的摩尔比例为40 : 40 : 10 : 10；负载mRNA的LNP非病毒载体的平均粒径为76.46nm-93.25nm，其Zeta电位为-0.95mV-+2.31mV，其PDI为0.212-0.321；所述的mRNA-LNP递送系统的制备工艺，包括如下步骤：S1.将可电离阳离子脂质、胆固醇、中性辅助磷脂和PEG脂质溶解在无水乙醇中，制备成储备溶液；S2.将相应的脂质成分按相应的摩尔比例混合在无水乙醇中作为有机相，至总脂质浓度为10mM，用PH=4.5醋酸-醋酸钠缓冲液将mRNA稀释至150μg/ml作为水相；S3.采用微流控制备系统将步骤S2中水相和有机相进行混合、乳化，得到负载一种或多种mRNA的LNP非病毒载体的颗粒悬液；步骤S3微流控制备系统的工艺参数如下表所示：阳离子脂质mRNA：总脂质体积比mRNA：总脂质流速比总流速(mL/min)Strat waste(mL)End waste(mL)40%3 : 13 : 1120.150.05步骤S3中，mRNA中的P元素与阳离子脂质中的N元素的摩尔比为1 : (4-8)。