← 返回列表
一种肝素N-磺基转移酶突变体构建方法
申请人信息
- 申请人:江南大学; 南京汉欣医药科技有限公司
- 申请人地址:214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号
- 发明人: 江南大学; 南京汉欣医药科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种肝素N-磺基转移酶突变体构建方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202210889750.3 |
| 申请日 | 2022/7/27 |
| 公告号 | CN117467632A |
| 公开日 | 2024/1/30 |
| IPC主分类号 | C12N9/10 |
| 权利人 | 江南大学; 南京汉欣医药科技有限公司 |
| 发明人 | 康振; 王阳; 陈松; 汤传根; 郗欣彤; 陈坚; 堵国成; 孟俊东 |
| 地址 | 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号; 江苏省南京市栖霞区仙林街道仙林大学城纬地路9号C5栋 |
摘要文本
本发明公开了一种肝素N‑磺基转移酶突变体构建方法，属于生物工程技术领域。本发明对人源的双功能酶(NCBI Reference Sequence : NP_001534.1)中的硫酸乙酰肝素N‑磺基转移酶1进行了改造，通过截短、单点突变、多点组合突变等生物技术手段，获得了能够使得稳定性和催化效率显著提升的肝素N‑磺基转移酶突变体。本发明提供的人源肝素N‑磺基转移酶突变体催化效率比人源肝素N‑磺基转移酶原始菌株提高了1.3倍，且在37℃下的稳定性也较野生型有显著提升，更有利于长时间催化获得高转化率的N‑磺酸化肝素前体。
专利主权项内容
1.一种肝素N-磺基转移酶突变体，其特征在于，所述肝素N-磺基转移酶突变体包括如下任一：(a)人源肝素N-磺基转移酶的N端前3个或4个氨基酸敲除；(b)将人源肝素N-磺基转移酶的第637位的丝氨酸突变为脯氨酸；(c)将人源肝素N-磺基转移酶的第741位的丝氨酸突变为脯氨酸；(d)将人源肝素N-磺基转移酶的第839位的谷氨酸突变为脯氨酸；(e)将人源肝素N-磺基转移酶的第842位的亮氨酸突变为脯氨酸；(f)将人源肝素N-磺基转移酶的第779位的赖氨酸突变为天冬酰胺并将第782位的精氨酸突变为缬氨酸；(g)将人源肝素N-磺基转移酶的N端敲除前4个氨基酸、第637位的丝氨酸突变为脯氨酸、第741位的丝氨酸突变为脯氨酸、第839位的谷氨酸突变为脯氨酸、第842位的亮氨酸突变为脯氨酸、第779位的赖氨酸突变为天冬酰胺和第782位的精氨酸突变为缬氨酸；所述人源肝素N-磺基转移酶的氨基酸序列如NCBI Reference Sequence : NP_001534.1的双功能酶的第599位的赖氨酸至第882的精氨酸所示。