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棕色脂肪透射电子显微镜样品的新固定方法
申请人信息
- 申请人:中国人民解放军海军军医大学
- 申请人地址:200433 上海市杨浦区翔殷路800号
- 发明人: 中国人民解放军海军军医大学
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 棕色脂肪透射电子显微镜样品的新固定方法 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311530577.9 |
| 申请日 | 2023/11/16 |
| 公告号 | CN117571436A |
| 公开日 | 2024/2/20 |
| IPC主分类号 | G01N1/36 |
| 权利人 | 中国人民解放军海军军医大学 |
| 发明人 | 魏纯纯; 谢志芳; 王平; 林方兴; 麻献华; 路明; 师建辉; 韩晴; 万晓庆 |
| 地址 | 上海市杨浦区翔殷路800号 |
摘要文本
本发明提出了一种棕色脂肪组织透射电子显微镜样品的新固定方法，以获得更好的线粒体和脂滴的超微结构。对啮齿类动物棕色脂肪组织的固定方法进行优化，主要包括将前固定剂中多聚甲醛的浓度从2％提高到4％；将后固定剂四氧化锇的缓冲液换成咪唑缓冲液；同时采用心脏灌注和浸泡结合的固定方式。新固定方法制备的棕色脂肪细胞的线粒体嵴及其他膜性细胞器的结构更完整；脂滴呈现为高电子密度的圆形结构。用该方法观察到了冷适应后棕色脂肪细胞线粒体嵴密度升高和脂滴增多现象。新固定方法能更好地保存棕色脂肪细胞中的细胞器特别是线粒体和脂滴的超微结构，可应用于研究该类型细胞在不同生理或病理条件下发生的超微结构变化。
专利主权项内容
1.棕色脂肪透射电子显微镜样品的新固定方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：啮齿类动物麻醉后，剪开右心耳，30s内匀速从左心室灌入37℃预温的8～12ml灌注用磷酸缓冲盐溶液，将血液快速冲出；然后立刻用8～12ml在4℃预冷的前固定剂心脏灌注固定，整个灌注在2min内完成；灌注固定后分离棕色脂肪组织，将组织切成1mm小块后放在前固定剂中室温浸泡固定1.8～2.2h；前固定结束后，用0.1mol/L磷酸盐缓冲液漂洗3次，每次10～15min，用0.1mol/L咪唑漂洗2次，每次10～15min；然后在后固定剂中室温固定0.8～1.2h。3