一种嵌合抗原受体T细胞的制备方法及其应用
申请人信息
- 申请人:山东丽山生物科技有限公司
- 申请人地址:250013 山东省济南市历下区经十路4577号明湖国际细胞医学产业园A栋201
- 发明人: 山东丽山生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种嵌合抗原受体T细胞的制备方法及其应用 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311695326.6 |
| 申请日 | 2023/12/12 |
| 公告号 | CN117384858B |
| 公开日 | 2024/3/8 |
| IPC主分类号 | C12N5/10 |
| 权利人 | 山东丽山生物科技有限公司 |
| 发明人 | 邱学良; 苏彦鑫; 杨学文; 张文丽; 齐昌; 王英宗 |
| 地址 | 山东省济南市历下区经十路4577号明湖国际细胞医学产业园A栋201 |
摘要文本
本发明涉及免疫技术领域，具体涉及一种嵌合抗原受体T细胞的制备方法及其应用。方法包括：(1)激活T细胞，T细胞激活17~19 h后采用完全培养基调整细胞密度8~9×106/ml，向完全培养基中加入慢病毒，同时加入聚凝胺，对激活后的T细胞进行培养；(2)培养6~8 h后加入完全培养基以稀释聚凝胺，继续培养；(3)培养至第3~5天，每天进行取样计数，根据计数结果补液，调整细胞密度至1×106/ml继续培养。(4)培养至第5~11天，每48 h进行取样计数，根据计数结果补液，调整细胞密度至1×106/ml继续培养。本发明的方法可以提高T细胞嵌合抗原受体基因转导效率。
专利主权项内容
1.一种嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)按外周血单个核细胞PBMC：人T细胞激活磁珠Beads=2 : 1选择Dynabeads人T活化剂与抗CD3以及抗CD28抗体偶联激活磁珠从分离的PBMC细胞中分选获得T细胞，激活T细胞，T细胞激活17~19 h后采用完全培养基调整细胞密度至8~9×10/ml，向含有激活后的T细胞的完全培养基中加入慢病毒，同时加入聚凝胺，对所述激活后的T细胞进行培养；所述聚凝胺的浓度为10 μg/ml；6其中，所述完全培养基的配制方法为：向X-VIVO 15 培养基中加入质量分数8%~12%的胎牛血清，再加入IL-2、IL-7和IL-15，至IL2的终浓度为280~320 IU/ml，IL-7的终浓度为8~12 ng/ml，IL-15的终浓度为8~12 ng/ml；(2)培养6~8 h后加入完全培养基以稀释聚凝胺，对所述激活后的T细胞继续进行培养，其中，所述完全培养基的加入量与步骤(1)中完全培养基的用量相同；(3)培养至第3~5天每天进行取样计数，根据计数结果补液，调整细胞密度至1×10/ml继续培养；6(4)培养至第5~11天每48 h进行取样计数，根据计数结果补液，调整细胞密度至 1×10/ml继续培养；6步骤(1)中激活T细胞之前，还包括：(1)分离与冻存外周血单个核细胞；(2)复苏外周血单个核细胞；(3)对T细胞进行分选。