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一种人羊膜上皮细胞的分离方法
申请人信息
- 申请人:广州正源生物技术有限公司
- 申请人地址:510000 广东省广州市南沙区珠江街南江二路6号自编9栋(7#)楼4层
- 发明人: 广州正源生物技术有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种人羊膜上皮细胞的分离方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311345053.2 |
| 申请日 | 2023/10/18 |
| 公告号 | CN117070443B |
| 公开日 | 2024/2/6 |
| IPC主分类号 | C12N5/073 |
| 权利人 | 广州正源生物技术有限公司 |
| 发明人 | 谢佳琦; 卢瑞珊 |
| 地址 | 广东省广州市南沙区珠江街南江二路6号自编9栋(7#)楼4层 |
摘要文本
广州正源生物技术有限公司取得“一种透气窗帘布”专利技术，本发明提供了一种人羊膜上皮细胞的分离方法，属于细胞分离技术领域。本发明采用硬质颗粒与消化试剂相结合，利用硬质颗粒在震荡过程中产生的剪切力对质地致密的羊膜进行组织初步分解、再结合消化试剂进行消化处理，克服了现有技术中人羊膜上皮细胞获取方法耗时长、细胞活率低、纯度低等问题。本发明提供的人羊膜上皮细胞的分离方法大大缩短了人羊膜上皮细胞的提取时间，提取的细胞污染几率低、数量充足、纯度和细胞活率较高；提取的细胞数量较稳定，利于产业应用。
专利主权项内容
1.一种人羊膜上皮细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：将羊膜组织碎块与硬质颗粒混合，进行振荡处理，得到分解组织；将分解组织与消化试剂混合，进行消化处理，终止消化后得到消化液；将消化液依次进行稀释、离心后得到细胞沉淀；将细胞沉淀接种至培养基，实现人羊膜上皮细胞的分离；所述消化试剂中含有蛋白酶和胶原酶；所述振荡处理的转速为2000~3000 r/min；所述振荡处理的时间为1~5min；所述硬质颗粒的粒径为1~2mm；所述硬质颗粒为玻璃珠或合金珠；所述消化试剂为StemPro Accutase细胞解离试剂；所述羊膜组织碎块与硬质颗粒的体积比为1 : 0.8~1.2；所述分解组织与消化试剂的体积比为1 : 2~3；所述消化处理的温度为35~38℃；所述消化处理伴随振荡，所述振荡的转速为200~300r/min；所述消化处理的时间为5~15min；所述离心的转速为2000~3000 r/min；所述离心的时间为3~8min；所述稀释采用的稀释剂为生理盐水；所述羊膜组织碎块的粒径在3mm以下。2