构建APOD条件敲入小鼠模型的方法
申请人信息
- 申请人:深圳华瑞模式生物科技有限公司
- 申请人地址:518074 广东省深圳市南山区沙河街道高发社区侨深路13号东方科技园华科大厦5-D3
- 发明人: 深圳华瑞模式生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 构建APOD条件敲入小鼠模型的方法 |
| 专利类型 | 发明授权 |
| 申请号 | CN202311800549.4 |
| 申请日 | 2023/12/26 |
| 公告号 | CN117467704B |
| 公开日 | 2024/3/26 |
| IPC主分类号 | C12N15/85 |
| 权利人 | 深圳华瑞模式生物科技有限公司 |
| 发明人 | 董洋 |
| 地址 | 广东省深圳市南山区沙河街道高发社区侨深路13号东方科技园华科大厦5-D3 |
摘要文本
深圳华瑞模式生物科技有限公司取得“一种透气窗帘布”专利技术，本发明涉及构建APOD条件敲入小鼠模型的方法，属于动物模型构建技术领域。为解决现有研究APOD的小鼠模型不能用于准确的研究APOD在某一组织的功能的问题，本发明提供了构建APOD条件敲入小鼠模型的方法，通过CRISPR/Cas9技术在小鼠的Rosa26基因位点定点敲入CAG‑LSL‑Apod‑Wpre‑pA表达框。本发明实现了高效率基因敲入，构建了能够稳定表达APOD基因的小鼠模型。将其用于研究APOD在某一组织中的功能时，可以准确调控APOD的表达，提高了APOD功能研究结果的可靠性。
专利主权项内容
1.构建APOD条件敲入小鼠模型的方法，其特征在于，通过CRISPR/Cas9技术在小鼠的Rosa26基因位点定点敲入CAG-LSL-Apod-Wpre-pA表达框；具体包括如下步骤：步骤一、通过体外转录的方式构建小鼠Rosa26基因位点的Cas9 mRNA和gRNA，所述gRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；步骤二、通过In-Fusion cloning的方法构建同源重组载体，所述同源重组载体包括5’同源臂、CAG-LSL-Apod-Wpre-pA和3’同源臂；所述5’同源臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述CAG-LSL-Apod-Wpre-pA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述3’同源臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；步骤三、将步骤一所得Cas9 mRNA、gRNA和步骤二所得同源重组载体共同注射到C57BL/6J小鼠受精卵中，获得F0代小鼠；步骤四、对F0代小鼠进行基因型鉴定，将阳性F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配得到F1代小鼠，对F1代小鼠进行基因型鉴定，阳性F1代小鼠即为所述小鼠模型。