本发明属于生物技术领域，具体涉及一种原核生物cDNA5′末端快速扩增方法，包括如下步骤：（1）利用牛痘病毒加帽系统对原核生物总RNA进行加帽；（2）以莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶进行反转录；（3）向体系中加入含有3′末端含有3个单脱氧鸟嘌呤的特异性模板转换引物（TSO），与cDNA的胞嘧啶尾退火杂交，反转录以TSO为模板继续转录；（4）巢式PCR扩增，第一轮PCR引物为与TSO互补的外侧引物和GSP1，第二轮PCR引物为与TSO互补的内侧引物和GSP2。
本发明为原核生物基因转录起始位点的鉴定提供了一种既简单又精确的方法。
特别适用于低丰度转录本5′末端的快速、精确扩增。

刘正飞 刘方 郑可

华中农业大学

430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种原核生物cDNA5′末端快速扩增方法，包括如下步骤：（1）利用牛痘病毒加帽系统对原核生物总RNA进行加帽；（2）以莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶进行反转录；（3）向体系中加入含有3′末端含有3个单脱氧鸟嘌呤的特异性模板转换引物（TSO），与cDNA的胞嘧啶尾退火杂交，反转录以TSO为模板继续转录；（4）巢式PCR扩增，第一轮PCR引物为与TSO互补的外侧引物和GSP1，第二轮PCR引物为与TSO互补的内侧引物和GSP2。
本发明为原核生物基因转录起始位点的鉴定提供了一种既简单又精确的方法。
特别适用于低丰度转录本5′末端的快速、精确扩增。